^ 1'' CONGRÈS INTERNATIONAL -^^7 D'HISTOCHIMIE ET DE CYTOCHIMIE ^^^^ Ist INTERNATIONAL CONGRESS OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY PARIS 28 AoGt - 3 Septembre 1960 28 August - 3 September 1960 RISUMES - ABSTRACTS z( libraryI * NOUVELLE FACULTE de MEDECINE 45 Rue des Saints Pères - Paris V« Published for the Organizers of the Conférence by PERGAMON PRESS ir OXFORD LONDON NEW YORK PARIS V Printed in Poland to the order of Paiistwowe Wydawnictwo Naukowe Warazawa by Zaklad Graficzny PWN Lôdz Manuscript received 20 June 1960 Printing completed 10 August 1960 Contents Table des matières INDEX DES AUTEURS - INDEX OF AUTHORS PROBLÈMES PHYSIQUES SECTION I. HISTOCHIMIE PREPARATIVE Chang J.P. and Hori S.H. II. APPLICATION TO LOCALIZATION OF ENZYMES A^D OTHER CHEMICALS 3 Grunbaum B.W. CYTOCHEMISTRY WITH THE ELECTRON MICROSCOPE ON FREEZE DRIED TISSUES 4 Cunningham G.J., Bitensky L., Chayen J. and Silcox A. A. THE PRESER- VATION OF CYTOLOGICAL AND HISTOCHEMICAL DETAIL BY CON- TROLLED TEMPERATURE FREEZE-DRYING 5 Orastein L., Davis B.J., Taleporos P. et Koulish S. "FREEZE-SUB- STITUTION" MÉTHODES POUR LA PRÉSERVATION DES STRUCTURES INTRACELLULARES ET DES ACTIVITÉS ENZYMATIQUES OU ANTIGÉNI- OUES , 6 Ghiringhelli F. CONTRIBUTION À L'ETUDE DES CELLULES ENTERO- CHROMAFFINES SELON LA TECHNIQUE DE CONGÉLATION-DESSICATION 7 SECTION II. ISOTOPES Leblond C.P., Kopriwa B. and Messier B. RADIOAUTOGRAPHY AS A HISTO- CHEMICAL TOOL 8 Zbarsky I.B. and Perevoschikova K.A. ON THE ROLE OF THE CELL NUCLEUS AND ITS FRACTIONS IN PROTEIN BIOSYNTHESIS AS EVIDENCED FROM INCORPORATION OF LABELED AMINO ACIDS 9 Kleinfeld R.G.andHaam von E. NUCLEIC ACID METABOLISM IN REGENERAT- ING RATLIVERUSING CYTIDINE-H' ^ 10 Erb W. et Hempel K. RECHERCHE AUTORADIOGRAPHIQUE COMPAREE DU MÉTABOLISME PROTIDIQUE DU NUCLEOLE, DU NOYAU ET DU CYTO- PLASME DANS DES CELLULES GERMINATIVES ET SOMATIQUES H Kob^jrg K. ÉTUDE AUTORADIOGRAPHIQUE DU METABOLISME DES PRO- TEINES ET DES ACIDES NUCLEIQUES DES CELLULES DU CARTILAGE ET DE L'OS 12 Plester D., Coburg E. et Hempel K. RECHERCHES AUTORADIOGRAPHIQUES SUR LE MÉTABOLISME DES PROTEINES DANS LES DIFFÉRENTS TISSUS DE LA COCHLÉE 13 Bamart E.A. and Marbrook J. THE APLICATION OF DIREQT TRITIUM- -LABELLING METHODS TO THE CYTOCHEMISTRY OF PROTEINS 14 Oehiert W. et Schuitze B. LE VOLUME DU NOYAU D'UNE CELLULE COMME SIGNE DE SON ACTIVITÉ SYNTHÉTIQUE 15 Rudkin G. T. LE MÉTABOLISME DES ACIDES NUCLÉIQUES DES CHROMO- SOMES GÉANTS DE DROSpPHILA MELANOGASTER 16 Schuitze B. et Oehiert W. ETUDE AUTORADIOGRAPHIQUE DU METABOLISME DE L'ACIDE RIBONUCLÉIQUE DANS LES ORGANES ET DANS LES STRUC- TURES DE LA CELLULE CHEZ LA SOURIS ET LE RAT 17 -III - Makarov P V. ANALYSE CYTOCHIMlQUE ET AUTORADIOGRAPHIQUE DU ROLE DES ACIDES NUCLÉIQUES DANS LA SYNTHÈSE DES PROTEINES CELLULAIRES ^^ 20 23 24 SECTION III. SPECTROGRAPHIE ULTRA- VIOLETTE Sandritter W. ULTRAVIOLETTMIKROSPEKTROPHOTOMETRIE Freed J J et Engle J.L. UN MICROSPECTROPHOTOMÈTRE SELON LE PRINCIPE DU "FLYING-SPOr' POUR QUANTIFIER L'ABSORPTION DES RAYONS ULTRAVIOLETS PAR DES CELLULES VIVANTES 22 Hâhrer H. und Kaffenberger H. VERGLEICHENDE UV-PHOTOMETRISCHE NUKLEINSÂUREBESTIMMUNGEN AN NORMALEN UND TUMORZELLEN DESMENSCHEN , j ^ ,. Meissel M.N., Bmmberg E.M., Grigprjeva T.A., Barski I.J. and Gutkina A.W. ULTRAVIOLET FLUORESCENCE MICROSCOPY AS A NEW nELD OF HISTOCHEMISTRY SECTION IV. SPECTROGRAPHIE VISIBLE Locquin M. HISTOPHOTOMÉTRIE (MICROPHOTOMETRIE, MICROSPECT.RO- PHOTOMÉTRIE) DANS LE VISIBLE , 25 Bianchi U. ANALYSE DE CERTAINS FACTEURS DE VARIABILITE DANS LE RELEVÉ DES DONNÉES HISTOM ÉTRIQUÉS 27 Duijn van P. and Persijn J.P. QUANTITATIVE STUDY OF THE FEULGEN REACTION WITH DNA CONTAINING CELLULOSE FILMS 28 Haie A.J. and Wilson S.J. THE DEOXYRIBONUCLEIC ACID CONTENT F LEUCOCYTES 29 Laquerrière R. et Laumonier R. COMMUNICATION N" 2. QUELQUES AS- PECTS QUANTITATIFS DE LA SYNTHÈSE DE L'A.D.N. EN RELATION AVEC L'HÊPATECTOMIE EXPÉRIMENTALE 30 SECTION V. SPECTROGRAPHIE INFRA-ROUGE Lecomte J. RAPPORT SUR L'UTILISATION DE LA SPECTROMÉTRIE INFRAROUGE EN HISTOCHIMIE ET EN CYTOCHIMIE 32 SECTION VI. FLUORESCENCE Lerma de HISTOSPECTROGRAPHIE DE FLUORESCENCE: RELATIONS FONCTIONNELLES ET BIOCHIMIQUES 33 Mayersbach H. IMMUNOHISTOCHIMIE 35 Evans E. E. and Kent S.P. THE USE OF A FLUORESCEIN-CONJUGATED BASIC POLYSACCHARIDE (APS) TO DEMONSTRATE ACIDIC POLY- SACCHARIDES IN TISSU E 36 Wittekind D. THE COMBINED FLUORESCENCE-PHASECONTRAST MICRO- SCOPY AS A METHOD OF INVESTIGATION IN THE PROCESS OF PHAGO- CYTOSIS 37 Bertalanffy von L. UN NOUVEAU CYTODIAGNOSTIC DU CANCER PAR MICROSCOPIE FLUORESCENTE 38 Zanotti L. APPLICATION D'HISTOPHOTOMÈTRE UNIVERSEL POUR ÉTABLIR LES COURBES DE FLUORESCENCE ET D'ABSORPTION 39 SECTION VII. POLARISATION PfeifferH.H. POLARIZED MICROSCOPY IN HISTOCHEMICAL RESEARCH 40 Lindner SPEZIELLE POLARISATION SOPTISCHE UNTERSUCHUNGEN AN EXPERIMENTELL VERANDERTEN BINDEGEWEBSFASERN 41 Romhânyi G. TOPOCHEMICAL REACTIONS IN POLARIZATION MICRO- SCOPY OF CONNECTIVE TISSUE AND ITS INTERCELLULAR SUB- STANCES 43 Missmahl H.P. DIE BEEINFLUSSUNG DES POLARISIERTEN LICHTES DURCH DIE AMYLOIDSUBSTANZ 45 -IV - SugârJ. RECHERCHES SUR LA MICROSCOPIE DE POLARISATION DES ACIDES NUCLÉIQUES. ACIDES NUCLÉIQUES DES TUMEURS 46 Sugâr J. DIE UISTOCHEMIE DER RETIKULÂREN FASERN UNTER BERÛCK- SICHTIGUNG DER POLARISATIONSOPTISCHEN UNTERSUCHUNGEN 47 SECTION VIII. INTERFÉRENCE SchiemerH.G. FEHLERBERECHNUNGEN FUR TROCKENGEWICHTSBE- STIMMUNGEN MIT DEM BAKER' SCHEN INTERFERENZMIKROSKOP 48 SECTION IX. MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE Barraett R.J. and Tice L.W. THE USE OF THE ELECTRON MICROSCOPE AS A TOOL FOR THE INVESTIGATIONS OF PROBLEMS IN CYTO- CHEMISTRY 49 LesslerM.A. CYTOCHEMICAL AND ELECTRON MICROSCOPE STUDIES OF FROG ERYTHROCYTES " 51 Nelson L. CHEMICAL MORPHOLOGY OF THE CONTRACTILE SYSTEM IN SPERMATOZOA ^ 52 Watson M.L. et Aldrige W. DIFFERENCIATION SELECTIVE DES ACIDES NUCLÉIQUES EN MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE 53 GWsh I. USE OF CERTAIN PROTEIN REAGENTS IN THE VAPOUR STATE FOR THE STAINING OF REACTIVE GROUPS IN FROZEN-DRIED SPEC- IMENS FOR ELECTRON MICROSCOPIC STUDIES 54 Grunbaum B.W. BIOCHEMICAL STUDIES AT THE ELECTRON MICROSCOPE LEVEL ON STRUCTURALLY INTACT FREEZE-DRIED SUBCELLULAR ORGAN ELLES ^ 55 Quinton Cox R. MODIFICATIONS PRECISES DE STRUCTURE DES ORGANES DES COBAYES SÉNESCENTS 56 Sheridan M. DES CHANGES DE L'ULTRASTRUCTURE AUX ORGANES DU COBAYE AVEC UNE DÉFICIENCE DE L'ACIDE ASCORBIQUE 57 Breslau A. M. and Erickson J.O. CORRELATION OF HISTOCHEMISTRY AND FINE STRUCTURE. OF THE IN VITRO SPHERULE OF COCCIDIOIDES IMMITIS 58 PROBLÈMES BIOCHIMIQUES SECTION I. PROTÉINES Brachet J. L'HISTOCHIMIE DES NUCLEOPROTEINES: LE ROLE DU NOYAU CELLULAIRE DANS LA SYNTHÈSE DES ACIDES NUCLÉIQUES ET DES PROTÉINES 61 Lison L. HISTOCHIMIE DES PROTÉINES 62 Delaraater E.D. and Echlin P. CATOCHEMICAL STUDIES ON THE NUCLEI OF BACILLUS MEGATHERIUM 64 Georgiev G. P.. THE STUDIES ON THE CELL NUCLEAR NUCLEOPROTEINS WITH THE AID OF PHENOL FRACTIONATION PROCEDURE 65 Littau V.C. ENZYMATIC REMOVAL OF RIBONUCLEIC ACID FROM TISSUE SECTIONS AND IST EFFECT ON THE BINDING OF DEOXYRIBONUCLEIC ACID TO PROTEIN SITES IN THE CYTÇPLASM 66 Zbarsky I.B. LA COMPOSITION PROTEIQUE ET NUCLEIQUE DE STRUC- TURES NUCLEAIRES ^ 67 Romanini M.G.M. LE PROBLEME DE LA SIGNIFICATION DE LA CELLULE GLANDULAIRE GASTRIQUE DES VERTÉBRÉS NON MAMMIFERES. CON- TRIBUTION HISTOCHIMIQUE 68 Schabadasch A.L. PRESENCE OF RIBONUCLEOPROTEINS IN MITOCHOND- RIA OF DIFFERENT ANIMAL CELLS AND THEIR FUNCTIONAL IM- PORTANCE 6Q - V Rappay G. VERGLEICHENDE HISTOCHEMISCHE STUDIEN DER NUCLEO- PROTEIDE IN DEN ROTEN BLUTZELLEN DER WIRBELTIERE 70 Sirlin J.K. Kato K. and Jones K.W. SOME ASPECTS OF THE BEHAVIOUR OF NUCLEAR RNA AND PROTEIN 71 SECTION II. POLYSACCHARIDES Takeuchi T. HISTOCHEMISTRY OF INTRACELLULAR POLYSACCHARIDE SYNTH ESIS , ^72 Guha S. et Wegmann R. ETUDES HISTOCHIMIQUES DE L'ACTIVITE PHOS- PHORYLASIQUE. MISE EN ÉVIDENCE PAR L'ACTIVATION DE LA PHOS- PHORYLASE KINASE 73 Planel H. et Guilhem A. LE GLYCOGENE DU CORTEX SURRENAL: NOUVEAU CRITÈRE HISTOCHIMIQUE D'ACTIVITE FONCTIONNELLE 74 McManus J.F.A. THE EFFECT OF VARIOUS SOLVENTS AND OTHER CON- DITIONS ON PERIODATE OXIDATION OF CARBOHYDRATES IN THE PAS REACTION 75 Friedenstein A.J. SOME ASPECTS OF CARBOHYDRATE METHABOLISM OF THE TRANSITIONAL EPITHELIUM ^ 76 Godlewski H. G. L'APPLICATION DE L'ACIDE DE L'ÉTHYLÈNEDIAMINE TATRACETIC (EDTA) X L'ÉTUDE HISTOCHIMIQUE DES PHOSPHORY- LASES ET DES "BRAN CHING ENZYME" 77 Bitensky L., Ellis R., Chayen J. and Silcox A. HISTOCHEMICAL STUDIES ON LIVER POLYSACCHARIDES 78 SECTION III. HISTOCHIMIE ÉVOLUTIVE Seligman A. DEVELOPMENTAL HISTOCHEMISTRY: INTRODUCTION OF NEW METHODS FOR LIGHT AND ELECTRON MICROSCOPY BY THE DESIGN AND PREPARATION OF APPROPRIATE REAGENTS AND SUBSTRATES 79 Melnick P.J. and Lawrence S. H. HISTOCHEMICAL ENZYME TECHNICS APPLIED TO STARCH GEL ELECTROPHORESIS 80 Wachstein M. and Meisel E. INTRACELLULAR DISTRIBUTION OF "THIO- LACETIC ACID ESTERASE" AND OF NONSPECIFIC ESTERASE 81 Atkinson W.B.andHerbener G. H. A QUANTITATIVE CRITIQUE OF GOMORI'S HISTOCHEMICAL METHOD FOR PHOSPHAMIDASE 82 Gay H. LA LOCALISATION CYTOCHIMIQUE DES ACIDES NUCLEIQUES ET DES PROTÉINES CELLULAIRES ET LA DETERMINATION DE LEUR MODE D'ASSOCIATION 83 Bloch D.P. and HEW H.Y.C. METHODS FOR CYTOCHEMICAL CHARACTER- IZATION OF NUCLEAR BASIC PROTEINS AND THEIR APPLICATION TO PROBLEMS IN DEVELOPMENT 84 Poort C. LES PROTÉINES DES NOYAUX ET DES^NUCLEOLES 85 Ostrowski K., Koraender J. et Kwarecki K. LA DETERMINATION QUANTITA- TIVE DE LA SOLUBILITÉ DES PROTÉINES DES TISSUS APRÈS LA FIXA- TION PAR DES MOYENS CHIMIQUES ET PHYSIQUES 86 Krasnov I.B. THE DETERMINATION OF SULFHYDRYL GROUPS OF PRO- TEINS BY MEANS OF THE INHIBITORY-INDICATOR (BROMOACETYL- NITRO-BENZOIC ACID) METHOD 87 Love R. and Suskind R.G. CHARACTERIZATION OF NINE TYPES OF RIBO- NUCLEOPROTEIN IN THE CELL BY THE TOLUIDINE BLUE-MOLYBDATE STAIN 88 Glenner G. G. HEW HISTOCHEMICAL METHODS FOR THE DEMONSTRATION OF PROTEIN-BOUND TRYPTOPHAN AND TYROSINE: A CRITIQUE AND EVALUATION 89 SECTION IV. MYCOPOLYSACCHARIDES Bélanger L.F. et Migicovsky B.B. LES RÉACTIONS COLORÉES POUR LA DÉTECTION DES MUCOPOLYSACCHARIDES INTERPRÉTÉES À LA LU- - VI - MIERE DE L' AUTORADIOGRAPHIE DU RADIO-SULFATE SYNTHETISE IN VIVO ET DU RADIO-CALCIUM ADSORBÉ IN VITRO 91 Spicer S.S. DIFFERENCIATION HISTOCHIMIQUE DE PLUSIEURS TYPES DE MUCOPOLYSACCHARIDES SULFATES CHEZ LES RONGEURS 92 Gibian H. LES MUCOPOLYSACCHARIDASES DU TISSU CONJONCTIF 94 Boriani V.A. CONTRIBUTION Â LA CONNAISSANCE DES SUBSTANCES MUCOPOLYSACCHARIDIQUES ET DU GLYCOGÈNE DANS L'ÉPITHELIUM DE LA MUQUEUSE RESPIRATOIRE NASALE NORMALE ET DANS LA MUQUEUSE EN PROIE À DES PHÉNOMÈNES DYSPLASIQUES PAR SUITE D'INFLAMMATIONS CHRONIQUES ASPÉCIFIQUES 95 Gandolfi M. CONTRIBUTION À LA CONNAISSANCE DES SUBSTANCES MUCOPOLYSACCHARIDIQUES DANS L'ÉPITHÉLIUM BRONCHIQUE HUMAIN, DANS LES CONDITIONS NORMALES ET DANS DES CONDITIONS PATHO- LOGIQUES 97 Fantin A.M. CELLULES MUQUEUSES ET CELLULES MUCOÏDES DE L'ÉPI- THÉLIUM GASTRIQUE DES OISEAUX 98 Geyer G. VERWENDUNG VON TETRAZONIUMSALZEN ZUM NACHWEIS VON SULFONSÂUREN 99 Barbetta F. CELLULES MUQUEUSES ET MUCOÏDES DANS L'EPITHELIUM GASTRIQUE DES PÇISSONS 100 Almeida de D.F. ETUDE HISTOLOGIQUE, CHROMATOGRAPHIQUE ET SPECTROPHOTOMÉTRIQUE DU MAXILON BLEU RL (GEIGY) 101 SECTION V. LIPIDES ET DÉRIVÉS D'OXYDATION Wolman M. LIPID CARBONYLS AND PRODUCTS OF OXYDATION OF LIPIDS 102 Polonovski J. LES LIPOPROTÉINES CELLULAIRES ET LEURS FONC- TION S EN Z YM ATI QU ES 10 4 Deb C. and Mukherji M. FURTHER STUDIES ON THE LIPID SITRIBUTION IN THE TISSUES OF HIBERNATING TOADS 106 Holczinger L. SUR LES CARACTÉRISTIQUES DE COLORABILITÉ DES LIPIDES "MASQUES" 108 Ogawa K. CYTOPLASMIC GRANULES OF ASTROCYTES CULTIVATED IN VITRO 109 SECTION VI. DÉSHYDROGÉNASES ET TRANSFERTS D'HYDROGÈNE Novikoff A.B. ELECTRON TRANSPORT ENZYMES: BIOCHEMICAL ASSAYS AND TETRA ZOLIUM STAINING STUDIES 110 Deane H. W., Lobel B.L.. Driks E.C. et Rubin B.L. ÉTUDES SUPPLÉMEN- TAIRES DE L'ACTIVITÉ DE L ENZYME STÉROÏDE-3/3-oI DïfSHYDRO- GÉNASE DES ORGANES REPRODUCTIFS DELA RATE 111 Melnick P.J. and Lawrence S.H. HISTOCHEMICAL ENZYME TECHNICS APPLIED TO STARCH GEL ELECTROPHORESIS 112 Tordet-Cari droit C et Wegmann R. ÉTUDES HISTOCHIMIQUES DES ACTIVI- TES SUCCINOOXYDASIQUE ET SUCCINODESHYDROGÉNASIQUE 113 Posalaky Z., Tôro I. und Gye'vai A. AKTIVITAT DES DEHYDROGENASE -SYSTEMS IM VERLAUFE DER SPERMIOGENESE 114 Yonezawa T., Bomstein M.B., Peterson E.R. and Muiray M.R. A HISTO- CHEMICAL STUDY OF OXIDATIVE ENZYMES IN MYELINATING CUL- TURES OF CENTRAL AND PERIPHERAL NERVOUS TISSUE 115 Chapeville F. et Khau van Kien L. CYSTÉINE DESULFHYDRASE DU SAC VITELLIN DES OISEAUX, SA DÉTECTION HISTOENZYMOLOGIQUE 117 Rosa C.G. THE USE F CYTO CHEMICAL TOOLS FOR STUDY OF OXI- DATIVE ENZYMATIC ACTIVITY IN CELLS OF VAGINAL SMEAR PRE- PARATIONS 118 Scarpelli D.G. INTRACELLULAR LOCALIZATION OF SUCCINIC DEHYDRO- GENASE AND DPN-DIAPHORASE AS REVEALED BY ELECTRON MICRO- SCOPY H9 - VII - Walker D.G. A HISTO CHEMICAL STUDY OF OXIDATIVE ENZYMES IN SK EL ETAL TISSU ES 120 SECTION VII. PHOSPHATASES Burstone M. S. AZO-DYE AND NAPHTHOLIC FLUORESCENCE TECHNIQUES FOR THE DEMONSTRATION OF PHOSPHATASES 121 Bankowski Z. et Vorbrodt A. HISTOCHIMIE DES ATP'ASES 123 Martin B.F. L'EFFET DE LA DISTENSION DE LA VESSIE SUR L'ÉPI- THÉLIUM DE LA PAROI ET SUR SA REACTION HISTOCHIMIQUE DE LA PHOSPHATASE ALCALINE 124 Yoshida M. and Poraerat CM. NUCLEOLAR CHANGES IN RELATION TO ATP 125 Essner E. et Novikoff A.B. L'ACTIVITÉ DE LA PHOSPHATASE ACIDE DANS LES LYSOSOMES HÉPATIQUES: LA DÉMONSTRATION, PAR LE MICROSCOPE ÉLECTRONIQUE, DE SON PRODUIT DE RÉACTION 126 Royal G.C., jr. HISTOLOGICAL AND PHYSIOCHEMICAL PARALLELS IN MICE FOLLOWING HETEROLOGOUS BONE MARROW TRANSPLAN- TATION 128 Rucart G. et Payeur- Villeneuve C. VARIATIONS DE LA PHOSPHATASE ALCALINE RÉNALE EN RAPPORT AVEC LE MÉTABOLISME PHOSPHO- CALCIQUE 129 Barka T. ÉTUDES SUR L'HÉTÉROGÉNÉITÉ DES PHOSPHATASES SPÉCIFI- QUES 130 Hollander R. RECHERCHES HISTOCHIMIQUES SUR LES SURRÉNALES ET LES REINS DE COBAYES 131 Sandier M. QUELQUES OBSERVATIONS HISTOCHIMIQUES SUR LE TISSU AORTIQUE HUMAIN À L'ATHÉROSCLÉROSE 132 Golarz N. L'HISTOCHIMIE DE LA DYSTROPHIE MUSCULAIRE HEREDI- TAIRE AUX SOURIS ET DE LA DYSTROPHIE MUSCULAIRE AUX RATS AVEC UNE DÉFICIENCE DE VITAMINE E 133 SECTION VIII. CATÉCHOLAMINES, INDOLS ET PHÉNOLS ViaUi M. PHENOLS ET INDOLS ET LE SYSTEME ENTEROCHROMAFFINE 134 Vitry G. HISTOCHIMIE DES CATECHOLAMINES DANS LA MÉDULLO- SURRÉNALE 135 Lillie R.D, REELECTIONS ON THE NATURE OF THE ENTEROCHRO- MAFFIN SUBSTANCE 136 Glenner G. G. NEW HISTOCHEMICAL METHODS FOR THE DEMONSTRATION OF PROTEIN-BOUND TRYPTOPHAN AND TYROSINE A CRITIQUE AND EVALUATION 137 Benditt E.P. Lagunoff D. and Holcenberg J.VAPOUP PHASE REACTIONS IN HISTOCHEMISTRY: DEMONSTRATION OF HISTAMINE AND SEROTONIN IN TISSUES ^ 138 Gerebtzoff M. A. et Dresse A. LIMITATIONS DES METHODES DE DÉTECTION HISTOCHIMIQUE DES CATECHOLAMINES DANS LES RECHERCHES SUR LE SYSTÈME NERVEUX CENTRAL ^ 139 Castoldi G. DÉTERMINATION DU POINT ISOÉLECTRIQUE APPARENT DES CELLULES ENTEROCHROMAFFINES AU MOYEN DE COLORATION A DES pH DIFFERENTS 140 Fiorentini A. OBSERVATIONS HISTOCHIMIQUES SUR LES GLANDES SALI- VAIRES POSTÉRIEURES DE ELEDONE MOSCHATA 142 Conrieri C. CARACTÉRISTIQUES HISTOMORPHOLOGIQUES ET HISTO- CHIMIQUES DES GLANDES GRANULEUSES DE RANA LATASTEI 143 Thomas L.E. THE NITROUS ACID-NAPHTYLFTHYLENEDIAMINE REACTION FOR THE HISTOCHEMICAL DEMONSTRATION OF INDOLES ^ 144 Sacchi M. CONTRIBUTION À L'ÉTUDE HISTOCHIMIQUE DES MELANOCYTES 145 Corona L. SUBSTANCES PHÉNOLIQUES DES VITELLOGÈNES DE DISTOMA HEPATICUM 146 -VIII Mira E. ACTION DE L'HORMONE SOMATOTROPE PREHYPOPHYSAIRE SUR LES CELLULES ENTÉROCHROMAFFINES DE RAT 147 Giusepçe G. OBSERVATIONS INTERFEROMÉTRIQUES SUR LES CELLULES ENTEROCHROMAFFINES 149 SECTION IX. HISTOCHIMIE INORGANIQUE Hintzsche E. HISTOCHIMIE DES CONSTITUANTS NON ORGANIQUES 150 Gedigk P. HISTOCHEMIE DES EISENSTOFFWECHSELS DER ZELLE -152 Poncelet P. LA FERRITINE DES PLEXUS CHOROÏDES 154 Neth R. ZUR METHODIK DES HISTOCHEMISCHEN EISENNACHWEISES 155 Shoden A. and Sturgeon P. COMPARATIVE HISTOCHEMICAL AND BIO- CHEMICAL STUDIES ON HEMOSIDERIN AND FERRITIN 156 SECTION X. NON CLASSÉS DIVERS Longley J.B., Burg M.B. et Burtner H.J. L'HÉTÉROGÉNÉITÉ FONCTION- NELLE DU TUBE URINAIRE PROXIMAL DEMONTREE PAR UNE DISTRI- ,BUTION EXPÉRIMENTALE DE MATIÈRES EN CIRCULATION DANS LE REIN DU RAT 158 McAlearJ.H. THE QUESTION OF UNIDENTIFIED SUBSTANCES ON CELLULAR MEMBRANES 160 Bing J. and Kazimierczak J. FURTHER STUDIES ON THE LOCALISATION OF RENIN IN THE KIDNEY 161 HISTOCHIMIE APPLIQUÉE SECTION I. TISSU CONJONCTIF Lindner DIE HISTOCHEMIE DES BINDFGEWEBES 165 Fucks B.B. HISTOCHEMICAL ANALYSISOF SOME MECH.ANISM OF REGEN- ERATION, MATURATION AND AGING OF CONNECTIVE TISSUF 167 FullmerH.M. THE OXYTALAN CONNECTIVE TISSUE FIBER IN HEALTH AND DISEASE 169 Mancini R.E., Vilar 0., Dellacha J.M., Davidson O.W. and Alvarez B. HISTO- LOGICAL LOCALIZATION OF FLUORESCENT SERUM PROTEINS AND THYROID-STIMULATING HORMONE IN THE CONNECTIVE TISSUE OF THE RAT 171 Tustanovsky A. A. A COMPARATIVE PHYSICAL AND CHEMICAL CHARAC- TERISTICS OF PRECOLLAGEN AND COLLASTROMINE 173 HolczingerL. ANWENDUNG HISTOCHEMISCHER LIPIDVERFAHREN IN RAHMEN DER BINDEGEWEBSUNTERSUCHUNGEN 174 Sugàr J. HISTOCHIMIE DES FIBRES RÉTICULAIRES AU COURS DES INVES- TIGATIONS POLARISANTES 175 SECTION II. HISTOCHIMIE ET ANATOMIE PATHOLOGIQUE NON TUMORALE Delaunay A. et Bazin S. HISTO- ET BIOCHIMIE DES FOYERS INFLAM- MATOIRES 176 Gonzalez LE. COMPARATIVE HISTOCHEMICAL STUDY OF HUMAN AND. EXPERIMENTAL.ATHEROGENESIS 177 Pasqualino A. et Boume G.H. ÉTUDES HISTO CHIMIQUES SUR L'HYPER- TENSION RÉNALE EXPERIMENTALE 178 Laumonier R. et Laquerrière R. QUELQUES APPLICATIONS DE L'HISTO- PHOTOMÉTRIE EN ANATOMIE PATHOLOGIQUE 180 Orlovskaya G.V. THE EVOLUTION OF THE PROTEIN-POLYSACCHARIDE COMPOSITION OF CARDIAC CONNECTIVE TISSUE IN THE DEVELOPMENT OF RHEUMATIC PROCESS 182 Strukov A.J. HISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN DES BINDEGEWEBS BEI EINIGEN PATHOLOGISCHEN VORGÂNGEN 183 -IX - Donskihk N.V., Vinogradov V.V. and Subbotin M. Y. ON HISTOCHEMISTRY OF EXTRAEMBRIONIC CONNECTIVE TISSUE IN PATHOLOGICAL CON- DITIONS 184 Christensen H.E. ÉTUDES SUR L'ORIGINE DE L'AMYLOÏDE 185 Hayashi M. and Fishman W.H. ENZYMORPHOLOGY OF ESTROGEN STIMU- LATED RAT VAGINA 186 Padykula H. A., Strauss E.W., Ladman A.j. and Gardner F.H. AMORPHOLO- GICAL AND UISTOCHEMICAL ANALYSIS OF THE HUMAN JEJUNAL EPITHELIUM IN NON-TROPICAL SPRUE ^ 187 Gundisdi M., Feszt T., Kemény G. et Almési S. ETUDE HISTOCHIMIQUE DES PHOSPHATASES PAR PONCTION-BIOPSIE DE FOIE CHEZ LES MALADES SOUFFRANT D'HEPATITE ÉPIDÉMIQUE 188 Mckelvey R. AN HISTOCHEMICAL COMPARISON OF ENZYMATIC CHANGES IN RATS MADE HYPERTENSIVE BY GOLDBLATT TECHNIQUE AND X-RAY EXPO SU RE 189 §vejda J., Paponsek F., Tomasek V. et Kotas J. LES MODIFICATIONS HISTOLOGIQUES, HISTOCHIMIQUES ET SPECIALEMENT ENZYMATIQUES DANS LE PARENCHYME PULMONAIRE SURTOUT DANS LES VAISSEAUX APRÈS UNE IRRADIATION UNIQUE AUX RAYONS X DU POUMON DU LAPIN 190 SECTION III. HISTOCHIMIE DU CANCER Godlewski H. G. HISTOCHIMIE DANS LES RECHERCHES ONCOLOGIQUES 191 Willighagen R.G.J. HISTOCHEMISTRY OF ENZYMES IN TUMOURS AND ITS SIGNIFICANCE IN PATHOLOGY 194 Vendrely HISTOCHIMIE DE L'ARN DES TUMEURS MALIGNES 195 Gundisch M.,^Feszt T., Keméiy G. et Hadnagy Cs. LES MODIFICATIONS DE L'ACTIVITÉ PHOSPHATASIQUE TISSULAIRE SOUS L'EFFET DE CER- TAINES SUBSTANCES CYTOSTATIQUES 1^6 Lindner A. CYTOLOGICAL CHANGES IN EHRLICH ASCITES TUMOR CELLS TREATED WITH ANTISERUM ^ 197 Defendi V. APPLICATION DES TECHNIQUES CYTOCHIMIQUES À L'ETUDE DE L'INTERACTION VIRUS-CELLULE 198 Vasiliev Ju.M. HISTOCHEMICAL STUDY OF THE CONNECTIVE- TISSUE CHANGES OBSERVED IN THE COURSE OF DEVELOPMENT OF INDUCED SARCOMAS IN RATS 200 Wattenberg L.W. A HISTOCHEMICAL STUDY OF OXIDATIVE ENZYMES IN CARCINOMA OF THE LARGE INTESTINE IN MAN 201 Schmidt-Matthiesen H. DIE HISTOCHEMISCHE DIFFERENZIERUNG DER CARCINOME AUF GRUND DER STROMAREAKTION 202 Chayen J., Silcox A. A., Aves E.K. and Barron A.L.E. THE HISTOCHEMISTRY OF RESPIRATORY ENZYMES IN CARCINOGENESIS 203 Monis B. and Weinberg T. CYTO CHEMICAL STUDY OF ESTER ASE ACTIV- ITY OF HUMAN NEOPLASMS AND STROMAL MACROPHAGES 204 Charachidzé L.K. RECHERCHE HISTOCHIMIQUE DU CANCER INDUIT DE LA PEAU 205 SECTION IV. PEAU ET GLANDES CUTANÉES Montagna W. and Ellis R.A. THE HISTOCHEMISTRY OF SKIN AND CUTA- NEOUS GLANDS , 206 ElHs R.A. and Montagna W. HISTOCHEMISTRY OF THE SKIN OF THE GORILLA {GORILLA GORILLA) 207 Hayashi M. and Fishman W.H. ENZYMORPHOLOGY OF ESTROGEN STIMU- LATED RAT VAGINA 208 ItÔM. L'ÉTUDE HISTOCHIMIQUE^ DES ÉPIDERMATOSES RÉACTIONNELLES 209 Braun-Falco 0. CONTRIBUTION À L'HISTOCHIMIE DU PSORIASIS 210 Jarrett A. SOME CONTRIBUTIONS OF FLUORESCENCE MICROSCOPY TO THE HIST0CHEMT'=;TRY OF THE SKIN 2ll Rakhawy M.T. HISTOCHIMIE DE LA LANGUE HUMAINE 212 -X - SECTION V. HISTOCHIMIE DU SYSTEME NERVEUX Poriugalov V.V. SOME MECHANISMS CONTROLING THE', CHEMICAL ACTIV- ITY OF THE NEURON MITOCHONDRIA ^ 213 Gerebtzoff M.A. LES CHOLINESTERASES DANS LE SYSTEME NERVEUX CENTRAL 214 Brodsky W.JA. THE NUCLEIC ACIDS OF THE NERVE CELL'S NUCLEUS AND CYTOPLASM 215 Fucks B.B. HISTOCHEMISTRY AND MORPHOLOGY OF NORMAL AND INJURIED NERVES 216 Yonezawa T., Bomstein M.B., Peterson E.R. and Murray M.R. A. HISTO- CHEMICAL STUDY OF OXYDATIVE ENZYMES IN MYELINATING CUL- TURES OF CENTRAL AND PERIPHERAL NERVOUS TISSUE 217 Adams C.W.M. and Tuqan N.A. HISTOCHEMISTRY OF DEMYELINATION 218 Gedevani M.D. ROLE DU SYSTEME NERVEUX DANS LE MÉTABOLISME DES MUCOPOLYSACCHARIDES 219 O'Rahilly R. et Meyer D.B. ÉTUDE HISTOLOGIQUE ET HISTOCHIMIQUE DES CELLULES VISUELLES DE LA RÉTINE DU POULET 220 Ua\id G.B. et Brown A.W. OBSERVATIONS Â LA MICROSCOPIE INTER- FÉRENTIELLE ET A L'HISTOCHIMIE SUR LE RÉSEAU CYTOPLASMATI- QUE DES CELLULES NERVEUSES DE QUELQUES MAMMIFÈRES 221 Schabadasch A.L. CYTOCHEMICAL AND CYTOPHYSIOLOGICAL PECULIARI- TIES OF NERVE TISSUE BIOLOGICAL ORGANISATION 222 Roskin G. COMPARATIVE HISTOCHEMISTRY OF NEURONS DIFFERING IN THEIR FUNCTION 223 Knjasewa G.D. ZUR HISTOCHEMISCHEN CHARAKTERISTIK EINER DIPHTHE- RISCHEN POLYNEURITIS 224 Vinnikov J.A. FUNCTIONAL CYTO- AND HISTOCHEMISTRY OF CORTI'S ORGAN 225 Polénov A.L. CONTRIBUTION HISTO-CHIMIQUE A L'ÉTUDE DE LA NEURO- SÉCRÉTION ENCÉPHALO-HYPOPHYSAIRE 226 Kuwabara T. and Cogan D.G. GLYCOGEN IN THE RETINA 227 Seite R. CONDITIONS DE FIXATION ET CYTOCHIMIE COMPARÉE DES ELABORATIONS FIGURÉES DANS LES CELLULES NERVEUSES DES GANGLIONS VÉGÉTATIFS ET RACHIDIENS 228 Tewari H.B. et Bourae G.H. HISTOCHIMIE DES CELLULES GANGLION- NAIRES DE LA MOELLE 230 Eliseev P. HISTOCHEMICAL CHANGES IN DIFFERENT ELEMENTS OF TISSUE UNDER THE PARTIAL REMOVAL AND CHRONIC IRRITATION IN THE CORTEX OF THE LARGE CEREBRAL HEMISPHERES 231 SECTION VI. HISTOCHIMIE DE LA DENT Weill R. ACQUISITIONS RECENTES EN HISTOCHIMIE DENTAIRE 232 Leblond C.P. ELABORATION OF DENTINAL COLLAGEN IN ODONTO- BLASTS- AS SHOWN BY RADIOAUTOGRAPHY AFTER INJECTION OF LABELLED GLYCINE AND PROLINE 234 Fleming H. S. STAINING OF NERVES IN TRANSPLANTED TEETH 236 Avery J.K. A POSSIBLE MECHANISM OF PAIN CONDUCTION IN TEETH 237 Quintarelli G. HISTOCHEMISTRY OF MUCOUS MEMBRANES 238 Bonting S.L. et Nuki K. ÉTUDE COMPARÉE DE LA DENT EN ÉVOLUTION CHEZ LE HAMSTER, EXÉCUTÉE AU MOYEN D'UN PROCÉDÉ ULTRA- MICROCHIMIQUE QUANTITATIF ET D'UNE MÉTHODE HISTOCHIMIQUE DE COLORATION 239 SECTION VII. HISTOCHIMIE ET PHARMACOLOGIE Lindner ANTIPHLOGISTICA- UND ANTIRHEUMATICAPRUFUNGEN MIT HISTOLOGISCH-HISTOCHEMISCHEN METHODEN 241 - XI - Ouastel J.H. CYTOCHEMICAL LOCALIZATION OF NEUROTROPIC DRUGS 243 Turchini J. et Castel P. DETECTION HISTOCHIMIQUE DE QUELQUES ELEMENTS MINERAUX UTILISES EN THÉRAPEUTIQUE 245 Schmidt-Matthiesen H. DIE PHARMAKOLOGISCHE BEEINFLUSSBARKEIT DÉR STROMAREAKTION BEI EXPERIMENTAL TUMOREN 246 Conalty M.L. and Jackson R.D. INTRACELLUL AR ACCUMULATION AND CRYSTALLISATION OF THE ANTITUBERCULOSIS RIMINO-COMPOUND, B.663 247 Presnov M. A. HISTOCHEMISTRY IN EXPERIMENTAL CANCER CHEMO- THERAPY 248 Bahn R.C., Ross G. T., Schrait R.W. and McElmury R.C. CHANGES IN NUMBER AND ANHYDROUS MASS OF ANTERIOR PITUITARY CELLS OF RATS AFTER ADMINISTRATION OF PROPYLTHIOURACIL 249 Gifndisch M., Feszt T., Szabô I. et Dézsi Z. LES MODIFICATIONS D^ L'ACTIVITE PHOSPHATASIQUE TISSULAIRE DES LAPINS INTOXIQUES PAR L'AQDE SILICIQUE 250 SECTION VIII. HISTOCHIMIE VÉGÉTALE Roberts L.W. HISTOCHEMICAL LOCALIZATION OF PROTEIN-BOUND SULFHYDRYL GROUPS IN PLANT TISSUES 251 Das N.K. et Alfert M. COLORATION ARGENTIQUE D'UN COMPOSANT NUCL^OLAIRE. ORIGINE ET COMPORTEMENT PENDANT LA MITOSE 252 Clowes F.A.L. THE LOCALIZATION OF NUCLEIC ACID SYNTHESIS IN ROOT MERISTEMS 253 Avers Ch.J. HISTOCHEMICAL STUDIES OF THE ENZYMES OF THE ROOT EPIDERMIS 254 Jensen W.A. THE DISTRIBUTION AND LOCALIZATION OF NUCLEIC ACIDS IN ROOTS 255 GHck D. A SURVEY OF CURRENT APPROACHES TO QUANTITATIVE HISTOCHEMISTRY OF PLANT TISSUE 256 Siegel S.M. HISTOCHEMICAL STUDIES ON LIGNIN FORMATION 257 Surrey K. HISTOCHEMICAL LOCALIZATION OF PROTEIN-BOUND AMINO GROUPS 258 Tiefel R.M. HISTOCHEMICAL STUDIES OF STEM MERISTEMS 259 Fleet van D.S. A SURVEY OF THE SIGNIFICANCE OF ENZYME LOCALIZA- TION TO THE SOLUTION OF PROBLEMS IN PLANT PHYSIOLOGY 260 SECTION IX. HISTOCHIMIE ET EMBRYOLOGIE Rossi F. et Reale E. ACQUISITIONS REGARDING ENZYMATIC HISTO- CHEMISTRY IN PRENATAL DEVELOPMENT 261 Feinendegen L.E. et Bond V.P. ÉTUDE DE LA SYNTHÈSE DES ACIDES NUCLÉIQUES EN CULTURE DE TISSUS, PAR DES MÉTHODES^ AUTO- RADIOGRAPHIQUES ET BIOCHIMIQUES EMPLOYANT DES NUCLÉOSIDES PYRIMIDINIQUES MARQUÉS AU TRITIUM ,^ 262 Delauney Y. et Das N.K. CYTOCHIMIE DU KINETOPLASTE DU TRYPANO- SOMA CRUZI 263 Mopre B.C. AUTORADIOGRAPHIC STUDIES OF H'-THYMIDINE INCORPORA- TION IN NORMAL AND HYBRID FROG EMBRYOS 264 Feinendegen L., Bond V.P., Shreeve W.W. and Painter R.B. RNA AND DNA METABOLISM IN HUMAN TISSUE CULTURE CELLS STUDIED WITH TRI- TIATED CYTIDINE 265 SECTION X. TRACTUS GÉNITAL Panigel M. ETUDE HISTOCHIMIQUE DE LA REPARTITION DE CERTAINS ENZYMES DANS LES TISSUS UTÉRINS ET PLACENTAIRES CHEZ LES MAMMIFÈRES 267 - XII - Index Adams C.W.M., 218 Aldridge W., 53 Alfert M., 252 Almasi S., 188 Almeida de D.F., 101 Alvarez B., 171 Atkinson W.B., 82 Av^rs Ch.J., 254 Avery J.K., 237 Aves E.K., 203 Bahn R.C., 249 Bankowski Z., 123 Barbetta F., 100 Barka T., 130 Barnard E.A., 14 Barmett R.J., 49 Barron A.L.E., 203 Barski I.J., 24 Bazin S., 176 Bélanger L. F., 91 Benditt E.P., 138 Bertalanffy von L., 38 Bianchi U., 27 BingJ.. 161 Bitensky L., 5, 78 Bloch D.P., 84 Bond V.P., 262, 265 Bon tin g S.L., 239 Boriani V.A., 95 Bomstein M.B., 115, 217 Bourae G. H., 178, 230 Brachet J., 61 Braun-Falco 0., 210 Breslau A. M., 58 Brodsky W.JA., 215 Brown A.W., 221 Brumberg E.M., 24 BurgM.B., 158 Burstone M. S., 121 BurtnerH.J., 158 Castel P., 245 Castoldi G., 140 Chang J.P., 3 Chapeville F., 117 Charachidzé L.K., 205 Chayen J., 5, 78, 203 Christensqn H.E., 185 Clowes F.A.L., 253 Coburg E., 13 Cogan D.G., 227 Conalty M.L., 247 Conrieri C, 143 Corona L., 146 Cunningham G.J., 5 Das N.K., 252, 263 David G.B., 221 Davidson O.W., 171 Davis B.J., 6 Deane H.W., 111 Deb C, 106 Defendi V., 198 Delamater E.D., 64 Delaunay A., 176 Delauney Y., 263 Dellacha J.M., 171 De'zsi Z., 250 Donskihk N.V., 184 Dresse A., 139 Driks E.C., 111 Duijn van P., 28 Echlin P., 64 Eliseev P., 231 Ellis R., 78 Ellis R.A., 206. 207 Engle J.L., 22 Erb W., 11 Erickson J.O., 58 Essner E., 126 Evans E.E., 36 Fantin A.M., 98 Feinendegen L.E., 262, 265 Feszt T., 188, 196, 250 Fiorentini A., 142 Fishman W.H., 186, 208 Fleet van D.S., 260 - XIII - Fleming H. S., 236 Freed J.J., 22 Friedenstein A.J., 76 Fucks B.B., 167, 216 Fullmer H.M., 169 Gandolfi M., 97 Gardner F.H., 187 Gay H., 83 Gedevani M.D., 219 Gedigk P., 152 Georgiev G. P., 65 Gerebtzoff M. A., 139, 214 Gersh I., 54 Geyer G., 99 Chiringhelli F., 7 Gibian H., 94 Giuseppe G., 149 Glenner G.G., 89, 137 Glick D., 256 Godlewski H. G., 77, 191 Golarz N., 133 Gonzalez LE., 177 Grigorjeva T. A., 24 Grunbaum B.W., 4, 55 Guha S., 73 Guilhem A., 74 Gutkina A.W., 24 GQndisch M., 188, 196, 250 Gyévai A., 114 Haam von E., 10 Hadnagy Cs., 196 Haie A.J., 29 Hayashi M., 186, 208 Hahrer H., 23 Hempel K., 11, 13 Herbener G.H., 82 HewQ.Y.C, 84 Hintzsche E., 150 Holcenberg J., 138 Holczinger L., 108, 174 Hollander R., 131 Hori S.H., 3 ItS M., 209 Jackson R.D., 248 Jarrett A., 211 Jensen W.A., 255 Jones K.W., 71 Kaffenberger H. Kato K., 71 23 Kazimierczak J., 161 Kemény G., 188, 196 Kent S.P., 36 Khau van Kien L., 117 Kleinfeld R.G., 10 Knjasewa G.D., 224 KoburgK., 12 Komender J., 86 Kopriwa B., 8 Kotas J., 190 Koulish S., 6 KrasnovI.B., 87 Kuwabara T., 227 Kwarecki K., 86 Ladman A.J., 187 Lagunoff D., 138 Laquerriere R., 30, 180 Laumonier R., 30, 180 Lawrence S.H., 80, 112 Leblond C.P., 8, 234 Lecomte J., 32 Lerma de, 33 Lessler M. A., 51 Lillie R.D., 136 Lindner, 41, 165, 241 Lindner A,. 197 Lison L., 62 Littau V.C., 66 Lobel B.L., 111 Locquin M., 25 Longley J.B., 158 Love R., 88 Makarov P.V., 18 Mancini R.E., 171 Marbrook J., 14 Martin B.F., 124 Mayersbach H., 35 McAlear J.H., 160 McElmury R.C., 249 Mckelvey R., 189 McManus J.F.A., 75 Meisel E., 81 Meissel M.N., 24 Melnick P.J., 80, 112 Messier B., 8 Meyer D.B., 220 Migicovsky B.B., 91 Mira E., 147 Missmahl H. P., 45 Monis B., 204 Montagna W., 206, 207 Moore B.C., 264 - XIV - Mukherji M., 106 Murray M.R., 115, 217 Nelson L., 52 Neth R., 155 Novikoff A.B., 110, 126 Nuki K., 239 Oehiert W., 15, 17 Ogawa K., 109 O'Rahilly R., 220 Orlovskaya G.V., 182 Omstein L., 6 Ostrowski K., 86 PadykylaH.A., 187 Painter R.B., 265 Panigel M., 267 Papou ^ek F., 190 Pasqualino A., 178 Payeur- Villeneuve C, 129 Perevoschikova K. A., 9 Persijn J.P., 28 Peterson E.R., 115, 217 PfeifferH.H., 40 Planel H., 74 Plester D., 13 P0I610V A.L., 226 Polonovski J., 104 Pomerat CM., 125 Poncelet P., 154 Poort C, 85 Portugalov V.V., 213 Posalaky Z., 114 Presnov M. A., 248 Quastel J.H., 243 Quintarelli G., 238 Quinton Cox R., 56 Rakhawy M. T., 212 Rappay G., 70 Reale E., 261 Roberts L.W., 251 Romanjni M. G. M., 68 Romhânyi G., 43 Rosa C.G., 118 Roskin G., 223 Ross G. T., 249 Rossi F., 261 Royal G.C, jr., 128 Rubin B.L., 111 Rucart G., 129 Rudkin G. T., 16 Sacdii M., 145 SandlerM., 132 Sandritter W., 20 Scarpelli D.G., 119 Schabadasch A.L., 69, 222 Schiemer H. G., 48 Schmidt-Matthiesen H., 202, 246 Schmit R.W., 249 Schultze B., 15, 17 Seligman A., 79 Seite R., 228 Sheridan M., 57 Shoden A., 156 Shreeve W.W., 265 Siegel S.M., 257 Silcox A. A., 5, 78, 203 Spicer S. S., 92 Sirlin J.K.. 7T Strauss E.W., 187 Stmkov A.J., 183 Sturgeon P., 156 Subbotin M.Y., 184 Sugar J., 46, 47, 175 Surrey K., 258 Suskind R.G., 88 Svejda J., 190 Szabô I., 250 Takeuchi T., 72 Taleporos P., 6 Tewari H.B., 230 Thomas L.E., 144 TiceL.W., 49 Tiefel R.M., 259 Tomâsek V., 190 Tordet-Cari droit C, 113 Tôrô I., 114 Tuqan N.A., 218 Turchini J., 245 Tustanovsky A. A., 173 Vasiliev Ju.M., 200 Vendrely, 195 Vialli M., 134 Vilar 0., 171 Vinnikov J.A., 225 Vinogradov V.V., 184 Vitry G., 135 Vorbrodt A., 123 Wachstein M., 81 Walker D.G., 120 Watson M.L., 53 WattenbergL.W., 201 -XV - Wegmann R., 73, 113 Yonezawa T., 115, 217 Weill R., 232 Yoshida M., 125 Weinberg T., 204 Willighagen R.G.J., 194 Zanotti L., 39 Wilson S.J., 29 Zbarsky I.B., 9, 67 Wittekind D., 37 Wolman M., 102 PROBLÈMES PHYSIQUES SECTION I. HISTOCHIMIE PREPARATIVE II. APPLICATION TO LOCALIZATION OF ENZYMES AND OTHER CHEMICALS JEFFREY P. CHANG and SAMUEL H. HORI Section of Expérimental Pathology, Department of Pathology, The University of Texas M. D, Anderson Hospital and Tumor Institute, Houston, Texas, U.S.A. The application of the section freeze-substitution technique to the lo- calization of enzymes and other substances in tissueâ is reported. The following hâve been readily and precisely demonstrated in frozen-substi- tuted tissues: oxidative enzymes, such as DPNH and TPNH diaphorases, succinic dehydrogenase and choline dehydrogenase; hydrolytic enzymes, such as alkaline and acid phosphatases, esterase, 5'-nucleotidase, amy- lophosphorylase, and beta-glucuronidase; and chemical substances other than enzymes, such as nucleic acids, carbohydrates, proteins and amino acids, inorganic éléments, and soluble isotopes. The section freeze- substitution technique appears to be a most versatile and reliable histo- chemical procédure. Studies are currently being conducted to demonstrate its fullest usefulness. - 3 - CYTOCHEMISTRY WITH THE ELECTRON MICROSCOPE ON FREEZE DRIED TISSUES BENJAMIN W. GRUNBAUM Department of Pediatrics and Cancer Research Institute, University of Califomia Médical Center, San Francisco 22, Calife mi a - 4 - THE PRESERVATION OF CYTOLOGICAL AND HISTOCHEMICAL DETAIL BY CONTROLLED TEMPERATURE FREEZE-DRYING »G. J. CUNNINGHAM, LUCILLE BITENSKY, J. CHAYEN and A. A. SILCOX Department of Pathology, Royal Collège of Surgeons, Lincoln's Inn Fields, London. The basis of ail histochemistry is the perfect préservation of ail com- ponents of the tissue. The technique by which cells are frozen, dried and then sectioned has certain drawbacks, which will be discussed. A method will be described by which tissue is frozen relatively slowly to — 70°C and sectioned at —20 to — 25°C. The cytological préservation is such that half an hour after injecting a liver carcinogen its effect on the structure of liver mitochondria can be observed. The distribution of enzymes such as allcaline phosphatase or dehydrogenases and enzy- matic metabolism of a carcinogenic agent hâve been studied without prior fixation, the sections being treated very much as are the tissue slices used by biochemists. The localization of lipids is demonstrable readily; in particular délicate lipid-protein bonds are unaffected by this preparatory procédure. Molecular orientation too is well preserved. This is shown best in plant cells for which no critical prepetfatory method has been available previously. - 5 - "FREEZE-SUBSTITUTION" METHODES POUR LA PRÉSERVATION DES STRUCTURES INTRACELLULARES ET DES ACTIVITÉS ENZYMATIQUES OU ANTIGENIQUES L. ORNSTEIN, B. J. DAVIS, P. TALEPOROS et S. KOULISH The Mount Sinai Hospital, New York City, U.S. A. (Le papier sera présente par le Docteur Léonard Ornstein) Préparées avec soin par "Freezing-drying" ou par "Freezing-substitu- tion", des coupes de tissu montrent une préservation remarquable de dé- tails intracellulaires dans les couches externes de cellules, a condition qu'elles n'aient pas été en contact avec de l'eau avant de les étudier. (La cellule vivante, vue à travers une grande ouverture dans un micro- scope a contraste de phase, est employée comme cadre de référence mor- phologique.) Le traitement de telles cellules sèches, bien préservées, avec certains ré'actifs anhydres, stabilise les protéines de sorte qu'une exposition des milieux ultérieure à l'eau ne détruira pas la structure délicate. L'exposition des tissus secs aux reactifs tels que 1 'OSO4 a 2%, le CljHg a 5% ou l'acide ATC dans des solvants anhydres tels que l'acéto- ne, la diméthylformamide et certains alcools, a basse température (—15 à — 75°C), aboutit a des différences assez grandes des vitesses d'insolu- bilisation de plusieurs protéines, comparées avec la vitesse d'inactiva- tion de l'activité' de leurs sites enzymatiques et antigeniques, tels que les deux procédés peuvent être facilement séparés; la fixation précède l'inactivation. La "Freeze-substitution" est suivie tout d'abord d'un temps bien contrôlé de fixation a basse température avec les reactifs indiqués et ensuite d'un enrobage et de fabrication de coupes par les moyens habi- tuels, au niveau des coupes on note une préservation excellente de la mor- phologie des tissus et une activité' assez abondante des enzymes et des substances antigeniques. Des microphotographies des hydrolases cellulaires et des coupes traitées par la technique de Coons seront démontrées. -6 CONTRIBUTION A L'ETUDE DES CELLULES ENTÉROCHROMAFFINES SELON LA TECHNIQUE DE CONGÉLATION-DESSICATION « FULVIO GHIRINGHELLI 'Istituto di Anatomia Comparata dell'Università di Pavia e Centre di Studio per l'Istochimica del C.N.R. Nous avons utilise la technique de congélation-dessi cation pour étudier les cellules entérochromaffines (Ce.) typiques du duodénum de cobaye. Nous avons pris en considération certaines caractéristiques histophysi- ques et histochimiques de ces cellules. Les résultats obtenus a l'aide de la méthode susdite sont les suivants: a) les ce. du matériel non fixé ne présentent, dans les coupes simple- ment déparaffinées avec le xylol, le benzol, le chloroforme ou le nonane, ni leur couleur propre, ni fluorescence appréciable a la lumière de Wood; b) l'exposition de coupes paraffinées libres ou de coupes adhérentes à la lamelle et déparaffinées avec le nonane, aux vapeurs de formaldéhyde, détermine a brève échéance (environ 2 heures) l'apparition de la fluore- scence jaune typique des Ce. et permet une excellente fixation du tissu; c) la post-fixation aux vapeurs de formaldéhyde permet la réussite des différentes techniques adoptées d'habitude pour reconnaître les ce. (Masson-Hamperl, Schmorl, Gibbs, diazoreaction alcaline, etc.); d) un traitement a l'alcool ethylique absolu, a l'acétone absolu, aux vapeurs d'alcool ethylique absolu, précédant la post-fixation aux vapeurs de formaldéhyde, empêche la démonstration histochimique des ce.; e) l'exposition de coupes libres paraffinées, pendant 24 heures, aux vapeurs d'acide osmique a 2%, ou pendant une demi-heure aux vapeurs d'iode métallique, détermine dans le premier cas un noircissement et dans le second cas un brunissement des granulations des ce. Si l'on fait précéder aux vapeurs d'acide osmique ou d'iode, la fixation aux vapeurs de formaldéhyde, on obtient une atténuation nette de la réactivité des cellules. -7 - SECTION II. ISOTOPES RADIOAUTOGRAPHY AS A HISTOCHEMICAL TOOL C. P. LEBLOND, BEATRIX KOPRIWA and B. MESSIER Department of Anatomy, McGill University Montréal, Canada -8 - ON THE ROLE OF THE CELL NUCLEUS AND ITS FRACTIONS IN PROTEIN BIOSYNTHESIS AS EVIDENCED FROM INCORPORATION OF LABELED AMINO ACIDS « I. B. ZBARSKY and K. A. PEREVOSCHIKOVA Biochemical Laboratory, State Oncological Institute Moscow, USSR Lebelled eimino acids (glycine-C", lysine-C", methione-S") injected into rats or mice, incorporate into nuclear proteins of liver spleen and other normal tissue cells only slightly less intensively than into the whole tissue proteins. The highest rate of radioactivity incorporation among nuclear proteins was found to be in the "acid protein" fraction which represents the ribonucleoproteins of nucleoli. The deoxyribonucleoprotein fraction is less active, while the residual protein forming nuclear membrane shows the least activity. Tumor cell nuclei show much lower incorporation and differ from normal cell nuclei in distribution of radioactivity among nuclear fractions. There was a différence from the normal pattern in regenerating rat liver after partial hepatectomy. The incorporation of labeled amino acids into proteins and an jincrease in protein nitrogen wereobserved also on the isolated nuclei of calf thymus and transplanted rat sarcoma "Mj" incubated in vitro with a mixture of amino acids and a factor produced by mitochondria. On the basis of the results presented it may be concluded that cell nuclei produce mostly spécifie proteins and nucleoproteins, determing nor- mal cellular development and differentiation. -9 - NUCLEIC ACID METABOLISM IN REGENERATING RAT LIVER USING CYTIDINE-Ht= RUTH G. KLEINFELD and E. von HAAM Department of Pathology, Ohio State University, Columbus, Ohio A study was made of RNA and DNA synthesis in rat liver parenchymal cells following 65—70% partial hepatectomy. Maie Wistar rats weighing 80—100 gm were given cytidine-H' (200 (mc per rat intraperitoneally) 18 hours following surgery. Animais were sacrificed in pairs (one laparoto- mized and one partially hepatectomized) at %, 1, 2, 3, 4, 5, 8, 12, and 24 hours following isotope injection. Sections 2 (i thick were subjected to differential extraction techniques making it possible to distinguish between cytidine incorporation into RNA and DNA. In the 18-hour regenerating rat liver, approximately 50% of parenchymal cells in the periportal régions of the lobule were synthesizing DNA in contrast to 5% in the centrolobular régions. The period from the end of DNA synthesis to the onset of mitosis (Gj time) was approximately 4 hours. A différence in the time course of incorporation of cytidine-H into nucleolar RNA was found in the periportal versus the centrolobular cells. Two RNA fractions having différent metabolic properties were indicated in both nucleoli and chroma^tin. Nucleolar RNA synthesis was found to occur in nuclei during the process of DNA synthesis. *Supported by U.S. P. H. S. Grant No. C-4077 and a grant from The American Cancer Society. - 10 - RECHERCHE AUTORADIOGRAPHIQUE COMPAREE DU MÉTABOLISME PROTIDIOUE DU NUCLÉOLE, DU NOYAU ET DU CYTOPLASME DANS DES CELLULES GERMINATIVES ET SOMATIQUES W. ERB und K. HEMPEL, Institut f. Medizinische Isotopenforschung der Universitât Koln A l'aide d'acides aminés marques par H-3, C-14, et S-35 on a fait des re- cherches autoradiographiques avec la technique du stripping film et de l'émulsion liquide au niveau du métabolisme protidique à 1 intérieur des structures cellulaires des cellules germinatives animales et végétales (Psammechinus miliaris. Fucus vesiculosus, Fucus serratus) et des cellu- les somatiques (souris, rat, lapin). La distribution de la densité des grains d'argent dans les autoradio- grammes de différentes cellules était indépendante de l'acide aminé mar- qué choisi. Les autoradiogrammes sont donc caractéristiques par l'intensité du métabolisme protéique a l'intérieur des structures cellulaires. La plus forte incorporation d'acide aminé dans les oocytes examinés s'est manifeste'e à l'intérieur du nocléole. Elle était beaucoup moins forte dans le reste du noyau. Dans les cellules somatiques examinées on ne trouvait pas d'incorpora- tion d'acide amine'^ au niveau du nucléole. Elle a plutôt lieu dans le noyau, liée a la chromatine du noyau. Cette incorporation est particulièrement intense dans l'entourage du nucléole et surtout au niveau de la chromatine associée au nucléole. Le comportement différent des oocytes et des cellules somatiques doit être discuté et comparé avec les résultats semblables donnes par d'autres travaux scientifiques. - 11 - ÉTUDE AUTORADIOGRAPHIQUE DU MÉTABOLISME DES PROTÉINES ET DES ACIDES NUCLÉIQUES DES CELLULES DU CARTILAGE ET DE L'OS E. KOBURG Institut f, Medizinische Isotopenforschung der Universitat KBln L intensité du métabolisme de la protéine des cellules des tissus conjonctifs, surtout des cellules du cartilage et de l'os (chondrocytes, ostéoblastes, ostéocytes et ostéoclastes) a été examinée par la méthode de l'autoradiographie (stripping-film AR 10 et e'mulsion liquide G5). Des souris, des rats, des cobayes, des lapins et des colombes ont servi pour ces recherches, réalise'es à l'aide des acides aminés marques â l'H— 3, au S— 35 et au C— 14. Après l'emploi de différents acides aminés marqués les autoradio- grammes oui. montre la même distribution des grains d'argent. En con- séquence, les autoradiogrammes reflètent l'intensité du métabolisme des protéines. Les re'sultats montrent que les ostéoblastes ont un métabolisme des protéines très grand. Ces cellules appartiennent, comme les cellules nerveuses, 1 epithelium de pancréas etc. à celles qui, dans l'organisme, ont le métabolisme des protéines le plus grand. Le métabolisme de la protéine est un peu plus petit dans les cellules de cartilage prolifère, des jeunes ostéocytes et des ostéoclastes. Les cellules de cartilage articulatoire et trachéale et les osté^ocytes situés dans l'os compact montrent un métabolisme des protéines très petit. En déterminant la densité des grains d'argent, il est possible d'ap- précier 1 intensité du métabolisme de la protéine dans les différentes cellules. Ces résultats sont compares avec les situations dans le reste de l'organisme. En ce que concerne le métabolisme ADN (H— 3— Thymidine) et le méta- bolisme ARN (H— 3— Cytidine, H— 3— Uridine) des cellules des os et du cartilage, des résultats autoradiographiques seront communiqués. -12- RECHERCHES AUTORADIOGRAPHIQUES SUR LE MÉTABOLISME DES PROTÉINES DANS LES DIFFÉRENTS TISSUS DE LA COCHLÉE D. PLESTER, E. COBURG et K. HEMPEL Le niveau du rae'tabolisme des protéines des différents tissus et des éléments cellulaires de la cochlee a été détermine par autoradiographie après administration de leucine marquée. L'imprégnation la plus importante par la leucine a eu lieu au niveau des cellules du ganglion spiral de la cochlée, un peu moins au niveau de la stria vascularis. L'importante fixation de cette protéine dans ce tissu confirme l'opinion selon laquelle la stria vascularis possède une certaine fonction secrétoire. Nous avons obtenu les mêmes résultats dans le corps ciliaire de l'oeil et dans le plexus choroïdien. En outre la membrane de Reissner dont le rôle n'est pas encore bien connu, présente aussi un niveau métabolique assez élevé. On peut penser que le métabolisme élevé au niveau de la membrane contribue au maintien de la grande différence de potentiel électrique entre les espaces endo- et périlymphatiques. Les cellules sensorielles de l'organe Corti ainsi que les cellules de soutien présentent un métabolisme très bas (environ 50 fois plus faible que celui des cellules du ganglion spiral de la cochlée). Nous avons pu faire des constatations comparables pour la rétine. Dans la membrana tectoria nous n'avons pas pu déceler de métabolisme protidi- que. En somme, le métabolisme des protéines observe grâce à la leucine marquée dans les tissus et les cellules de la cochlee montre un parallélisme intéressant avec celui des tissus et des cellules de l'oeil et des autres tissus de l'organisme. - 13 - THE APLICATION OF DIRECT TRITIUM-LABELLING METHODS TO THE CYTOCHEMISTRY OF PROTEINS E. A. BARNARD and J. MARBROOK Department of Zoology, University of London King's Collège, Strand, London W.C.2. Isotopic labels can be employed with advantage in directiy-applied cyto- chemical reagents forming covalent bonds at sites in proteins and other macromolecules. The difficulties of introducing sufficient light-absorbing structures, and the related problems of micro-spectrophotometry, can be avoided hère. Thèse methods must be distinguished from those in which the isotope is introduced metabolically prior to fixation, and also from those in which a labelled enzymic reaction product is adsorbed. We hâve examined the application of small tritiated reagent molécules to the quantitative cytochemistry of protein groups. High resolution, and ample labelling after very short exposures, are obtained thus with tritium. The factors involved in obtaining accurate quantitative results with such reagents hâve been examined. While comparative measurements can bemade readily, absolute measurements can also be obtained but only after cali- bration of each system investigated. Measurements hâve been made on the total number of groups available to acylation, and on the amino groups of proteins in varions situations. Comparison with micro-spectrophotometric measurements using colour-form- ing reagents can give valuable calibrations of the latter methods. The similar use of tritiated groups in labelling anti-bodies for cyto- chemical application, e.g. for enzyme localisations, will also be discussed. - 14 - LE VOLUME DU NOYAU D'UNE CELLULE COMME SIGNE DE SON ACTIVITÉ SYNTHÉTIQUE (Etude autoradiographique de l'incorporation de H-3-Leucine et de C-14-acides aminés pour différents types de cellules chez le rat) W. OEHLERT* und B. SCHULTZE** L'incorporation de H'-Leucine et de C*'* acides aminés dans les dif- férents organes du rat a ete examine' par la méthode autoradiographique. Au-dessus des noyaux de 26 différents types des cellules le nombre moyen des grains d'argent par noyau fut compte. En même temps le volume des noyaux fut mesuré. Les résultats montrent que la synthèse des protéines dans le noyau par unité de volume a presque la même valeur pour tous les types des noyaux examines. L'intensité de la synthèse des protéines dans le noyau est donc proportionnelle au volume du noyau. Par exemple, l'incor- poration des acides aminés dans les protéines du noyau est plus intense chez cerataines cellules ganglionnaires que chez les lymphocytes (follicule de rate). Avec la maturation des follicules de l'ovaire on observe une augmentation de l'incorporation des acides aminés dans les protéines du noyau, qui est proportionnelle au volume du noyau en croissance. La même proportionnalité se trouve dans les différences de volume des noyaux du foie. Probablement l'hydratation d'un noyau a une importance essentielle pour son activité synthétique. Les résultats confirment directement l'hypothèse que la croissance du noyau qui accompagne les différents accroissements fonctionnels ("Kernschwellung" et "Kernoedem") est le signe d'une augmentation de l'activité synthétique du noyau. *Pathologisches Institut der Universitat Freiburg i. Br. **Institut fur Medizinische Isotopenforschung der Universitat Kôln 15 - LE METABOLISME DES ACIDES NUCLEIQUES DES CHROMOSOMES GÉANTS DE DROSOPIIILA MELANOGASTER* GEORGE T. RUDKIN The Institute for Cancer Research, Philadelphie 11, Pennsylvania, U.S. A. I L'étude du métabolisme des acides nucléiques des chromosomes a été abordée par la comparaison, chez la Drosophile, de l'incorporation loca- i lisée de précurseurs marqués à l'aide du tritium, et de l'absorption des rayons ultraviolets dans les mêmes régions ou bien dans des régions ho- mologues. On a injecté soit de la thymidine-H' soit de la cytidine-H' au stade larvaire terminal. Les animaux ont été disséqués à divers intervalles de temps, jusqu'à une durée maximum de 7 heures, moment où plusieurs d'entre eux se transformaient en larve. Les chromosomes de ceux-ci ont notamment des "pouffs" qui se forment et qui disparaissent en des ré- gions caractéristiques. Les glandes salivaires ont été fixées a l'acide acétique 45% et des "squashes" préparés sur des lames de verre ou de quartz, recouvertes ensuite d'une couche d'émulsion autoradiographique. Nos résultats antérieurs ont démontré que la formation des "pouffs" se réalise indépendamment de l'incorporation de la thymidine, mais qu'elle est accompagnée d'une incorporation augmentée de la cytidine. Selon les données plus récentes sur l'absorption des ultraviolets, l'accroissement de la cytidine, lié à la formation des pouffs,peut s'expliquer par la teneur augmentée de l'ARN de ces régions, vu que l'activité de l'ARN (quantité de la cytidine-H' relative à l'absorption des ultraviolets) est égale dans les deux régions pouffs et non-pouffs. Les chromosomes marqués par l'injection de la cytidine-H' se présentent en deux catégories: l'une où ] les régions pouffs sont relativement fortement radioactives (plus de 90% des noyaux), et l'autre où le niveau de radioactivité est assez limité comme dans le cas de la thymidine-H' (moins de 10%). Ceci nous amène | à penser que la synthèse de l'ARN des chromosomes manque ou se pro- duit très peu au moment où l'ADN est en train d'être synthéthisé. ♦Travail réalise avec l'aide d'une subvention (C— 1613) du "The National Cancer Institutes of Health", United States Public Health Service et une subven- tion institutionnelle du American Cancer Society, Inc. - 16 - ÉTUDE AUTORADIOGRAPHIQUE DU MÉTABOLISME DE L'ACIDE RIBONUCLÉIQUE DANS LES ORGANES ET DANS LES STRUCTURES DE LA CELLULE CHEZ LA SOURIS ET LE RAT B. SCHULTZE* und W. OEHLERT** Apr^s l'injection de H'-Uridine et de H*-Cytidine le métabolisme de TARN a été examiné dans les organes et dans les structures de la cellule chez la souris et le rat par la méthode autoradiographique. Les autoradiogrammes des différents organes après injection 1° des diffe'rents précurseurs de TARN et 2° des différents acides aminés marques de H', S" ou C" montrent une distribution et un noircissement très semblables. Cela signifie qu'il existe une proportionalite non seulement entre la quantité de l'ARN d'une cellule et la synthèse de protéines (Caspersson, Brachet) mais aussi entre la synthèse de l'ARN et la synthèse de protéines. La signification de cette relation nouvelle sera discutée. Après l'injection de H'-Uridine et de H*-Cytidine le nombre des grains d'argent au dessus du nucléole, du noyau et du cytoplasme chez différents types des cellules a été compte en fonction du temps entre injection et sacrifice des animaux (10 min— 36 h). Quelques minutes après l'injection la densité des grains d'argent au-dessus du nucléole est considérablement plus grande qu'au-dessus de la chromatine du noyau. Plus tard on observe aussi des grains d'argent au-dessus du cytoplasme. Les courbes, donnant le nombre des grains d argent en fonction du temps, montrent qu'il existe une synthèse de l'ARN dans le nucléole et aussi en connexion avec les structures de la chromatine du noyau. La synthèse de l'ARN dans le noyau (sans nucléole) est plus grande que celle dans le nucléole. Une discussion quantitative des courbes trouvées montre qu'il existe probablement un transport de l'ARN du noyau au cytoplasme. *Institut fiir Medizinische Isotopenforschung der Universit'at K'dln. **Pathologisches Institut der Universit'at Freiburg i. Br. - 17 - ANALYSE CYTOCHIMIQUE ET AUTORADIOGRAPHIQUE DU RÔLE DES ACIDES NUCLÉIQUES DANS LA SYNTHÈSE DES PROTÉINES CELLULAIRES P.V. MAKAROV Laboratoire de cytologie à l'Université de Leningrad, URSS Chaire de biologie générale de Médecine hygiénique Leningrad, URSS On a choisi comme objet d'étude les oocytes de grenouille, les . cellules des glandes salivaires des larves de Drosophila, les oeufs en état de clivage de Parascaris equorum etc. Les études avaient pour but la dé- termination du contenu des acides nucléiques (ADN et ARN), des pro- téines basiques et acides, ainsi que l'incorporation de methionine S^ et de phosphate de sodium P*^ Au cours du développement des noyaux des oocytes, on observe les phénomènes suivants: la synthèse continue des protéines acides, l'ab- sence des protéines basiques dans le nucleoplasme; la présence de l'ADN n'a pu être constatée jusqu'à présent. On voit dans ces noyaux une incorporation intense de methionine S'^ et de P'*. Dans la période du mois d'octobre jusqu'au mois de janvier, l'incorporation des isotopes examinés dans les oocytes de forme menue et moyenne prend fin, et les oocytes passent a l'état d'interphase. Vers la mi-hiver, la synthèse ininterrompue des protéines acides de noyaux et de nucléoles dans de gros oocytes se ralentit, et c'est a ce moment qu'on commence a observer la présence de nucléohistones liées aux chromosomes. La formation des protéines nucléaires acides pendant la télophase est suivie dans les oeufs en état de clivage chez Parascaris equorum par la perte de l'ADS et de protéines basiques. Au cours de la prophase, on observe a nouveau la synthèse des nucléohistones. Les noyaux en croissance des glandes salivaires des larves de Drosophile s'enrichissent de nucléohistones localisées dans des chromosomes gigantesques. La synthèse des pro- téines acides s'y passe à une échelle plutôt moyenne, ce qui est con- firmé par les données de l'autoradiographie. Tous ces résultats obtenus permettent d'avancer la supposition que la synthèse des protéines nu- cléaires acides s'effectue aux dépens des nucléohistones, de 1 ADN - 18 - pour la plupart, et cette dernière à son tour se forme sous l'action des protéines acides du noyau. Durant la vitellogénèse, on observe dans les oocytes de grenouille la dépense de TARN cytoplasmatique. Au cours de l'interphase, quand la synthèse protéique s'arrête, on constate l'augmentation très accentuée du contenu de l'ARN. Par conséquent, l'abondance du cytoplasme de l'ARN ne peut être considérée comme une indication de la synthèse intense des protéines cytoplasmatiques. La vitellogénèse terminée, le nombre de nucléoles dans les gros oocytes augmente plus de 7 fois (de 200 a 1500). Cela peut servir de témoignage que la masse considé- rable de nucléoles ne confirme point le niveau élevé' de protéines déjà formées du cytoplasme. - 19 - SECTION III. SPECTROGRAPHIE ULTRA- VIOLETTE ULTRA VIOLETTMIKROSPEKTROPHOTOMETRIE W. SANDRITTER* Senckenbergisches Pathologisches Institut der Universitat Frank furt am Main The cytophotoraetry with UV-light as introduced by Caspersson in 1936 placed a new sphère of investigational possibilities within reach of photometric methods. The measurements of biological objects with dimen- sions of a few u and concentrations and weights in the range of 10' g became a practical reality. A review of this complex field, in which many of the fundamentals are still being discussed, should be directed toward, 1) revealing possible sources of error 2) the comparison of UV-cytophoto- metry proven methods of measurement currently in use 3) emphasizing those areas in the médical and biological sciences where the new method may be profitably applied. The first part, using our own equipment as examples, describes the apparatus for photography with UV-light. A one beam cytophotometer which was built from purchasable éléments and a two-beam scanning- cytophotometer with automatic registration are also described. The discussion of theoretical fundamentals gives spécial attention ^o the possibilities of errors introduced both by the apparatus and the biological object. Nine basic conditions which are prerequisites for cytophotometric measurements are defined. The numerical aperture of the objective must be not less than 0*85 to insure inclusion of stray light. Smaller numerical apertures lead to an increase of extinction. The numerical aperture of the condensor must be smaller than that of the objective {%-%). The smallest measurable object is approximatly 3 to 4 times larger than the wave îength of the incoming light. ... , The non-homogenous character of absorbing material (in interdepen- ■ dence on the distribution of chromophores and the peak of extinction) leads, by large photomultiplier openings, to a lowering of the measured extinction. This error can be eliminated by using a small photomultiplier opening. The various indexes of refraction within the biological object itself increase the stray light emd consequently the non-absorption light loss. Freezing drying of the tissue and matching of the refraction indexes are prerequisites for accurate measurements. -20 - The stray light which appears in monochromator and microscope can be appreciably reduced. Trials on the modél-system to test the apparatus must be made. The interprétation of results requires an exact knowledge of the absorbing substances to be measured in UV-light as well the changes in absorption which occur when they are exposed to other influences (fixa- tion, pH changes etc). The fields of application open to UV-photometry are briefly discussed in the second part. Very satisfying results are obtained with this method in the field of genetics. The nucleic acid content of the individual cell can be measured in absolute units. Since both DNA and RNA absorb UV-light, values for DNA are obtained only after treatment with ribonu- clease. The UV-photometry may shed new light on the significance of RNA for cell division and growth as well as on the function of gland cells, nerve cells and endocrinological organs. Own investigations on the relation between nucleolus and RNA in the adrenal cortex cytoplasraas well as those made on the Langerhans islands of the pancréas may be cited as examples. The new method will prove especially valuable in the field of tumor pathology. The possibility of cytodiagnosis with photometry should be given spécial considération. Pronounced changes in the nucleic acid-protein metabolism following virus infection hâve also been observed. The UV-absorption range of 300—400 m^, in which the thyroid colloid and certain pigments such as the carotinoids and enzymes of the citnis acid cycle évidence absorption hâve received relatively little attention. The first investigations of the lipofuscin-pigment, haemosiderin and melanin are presented hère. The areas of apllications for the cytophotometry in biological and médical sciences hâve by no means been exhausted. - 21 UN MICROSPECTROPHOTOMETRE SELON LE PRINCIPE DU "FLYING-SPOT" POUR QUANTIFIER L'ABSORPTION DES RAYONS ULTRAVIOLETS PAR DES CELLULES VIVANTES* J.J. FREED and J.L. ENGLE The Institute for Cancer Research, Philadelphia 11, Pa, U.S. A. Une modification du microscope a "flying-spot" est en train d'être mise au point dans notre laboratoire, dans le but de réaliser l'analyse sériée de la quantité d'acides nucléiques et de protéines dans une même cellule vivante, selon l'absorption des rayons ultraviolets. Le système permet la formation de l'image avec une perte minimum des rayons ultraviolets entre l'objet éclairé et le détecteur photosensible. Le réglage de la mise au point d'ailleurs n'exige pas de radiation excessive; ainsi est assuré un rendement plus efficace, exprime comme le rapport "signal/bruit" par unité de la dose ultraviolette appliquée a la cellule. Cependant, le tube des rayons cathodiques qui a servi pour l'émission des rayons dans les microscopes à **flying-spot jusqu'ici ne donnait pas de rayons monochromatiques d'intensité assez forte; l'appareil nouveau dépend donc d'un système mécanique pour la formation du "raster . Une lampe à arc et un monochromateur fournissent une source très étroite de lumière monochromatique; celle-ci est réduite par des optiques spéciales perméables à l'ultraviolet à un point très petit dans le plan de l'objet. Un miroir, pourvu d'un système de balayage vertical et horizontal, déplace l'image du point et produit un "raster" de 240 lignes, caractérise par une durée de balayage vertical de deux secondes et par des proportions égales. Un tube photomultiplicateur est place en contact avec l'objet; son signal est amplifié et est relie au tube de télévision ayant un écran de haute persistance. Le signal est intègre pour la surface désirée à l'intérieur du "raster", rendant donc possible le calcul de la quantité de matérial qui absorbe les rayons dans une cellule ou dans une partie localisée de la cellule. I *Aidé par une subvention AT((30— 1) 2356 accordée par la United States Atomie Energy Commission. - 22 - VERGLEICHENDE UV-PHOTOMETRISCHE NUKLEINSÂUREBESTIMMUNGEN AN NORMALEN UND TUMORZELLEN DES MENSCHEN* H. HÀHRER uad H. KAFFENBERGER** UV-photometrische Messungen des Nukleinsauregehaltes von Spermien (Mensch, Bulle) und diploiden Zellen (Thymuslymphocyten, Zellen des Bronchialbaumes) zeigen, dass sich der Nukleinsauregehalt (DNS) dieser Zellen entsprechend der Chromosomenzahl wie 1 : 2 verhalt. Die Nuklein- saurebestimmungen an Zellkeraen von 6 menschlichen Carcinomen ergeben, dass aile Tumoren einen hohen Prozentsatz (19-83%) an Zelikernen auf- weisen mit einem iiber einer gewissen Grenze liegenden Nukleinsaurege- halt. In normalen Zellpopulationen kommen maximal nur 12% Zellen mit erhbhtem Nukleinsauregehalt vor. Eine photometrische Cytodiagnostik scheint demnach aussichtsreich. Eine nâhere Analyse der Haufigkeitsgruppierungen der Messwerte einzelner Tumoren lasst erkennen, dass jeder Tumor individuelle Ver- doppelungsreihen aufweist, die von den normalen euploiden Chromosomen- s'àtzen bzw. DNS-Gehalt abweichen. Der erste Haufigkeitsgipfel "Stem- -line" liegt bei den meisten untersuchten Tumorpopulationen zwischen diploiden und tetraploiden Werten, nur zwei Tumoren zeigen eine hypodi- ploide Stammlinie. *Mit UnterstUtzang der Deutschen Forschnngsganeinschaft. **Saickenbergisches Pathologisches Institut der UniversitSt Frankfurt am Main (Abteilung Prof. Dr, Sandritter), Gartenstrasse 229, Deutschland. -23 - ULTRAVIOLET FLUORESCENCE MICROSCOPY AS A NEW FIELD OF HISTOCHEMISTRY M. N. MEISSEL, E. M. BRUMBERG, T. A. GRIGORJEVÂ, L J. BARSKI and A. W. GUTKINA Institute of Biophysics, Academy of Sciences of USSR, Moscow Fluorescence raicroscopy in visible spectral région bas already occupied a definite place among important histochemical methods. As it is well known it requires in most cases the usage of fluorescent stains for revealing spécifie substances in cells and tissues. Fluorescence microscopy in ultraviolet région spectral, which does not need any fluorocbromes, allows to detect by photographie means with subséquent colour transformation of the images, the ultraviolet autofluorescence of cells, tissues and other biological objects. The spécifie nature of this autofluorescence dépends on the peculiarities- of their chemical composition and physico-chemical state. The systematic investigations of différent tissues and organs showed that many of them possess strongly pronounced emd spécifie ultraviolet autofluorescence. We hâve corne to conclusion that ultraviolet fluorescence microscopy appears to be of great importance for the histochemical studies of such objects as muscle, collagenes, and some secreting cells. - 24 - SECTION IV. SPECTROGRAPHIE VISIBLE HISTOPHOTOMETRIE (MICROPHOTOMÉTRIE. MICROSPECTROPHOTOMETRIE) DANS LE VISIBLE M. LOCQUIN Principe. Utilisation des données photométriques d*une image vue au microscope pour étudier qualitativement et quantitativement la répartition histologique ou cytologique de constituants cellulaires colorés naturelle- ment ou artificiellement. Historique. De la microphotométrie globale, par réduction de la plage sur laquelle porte la mesure, on passe à la microphotométrie ponctuelle, a laquelle le nom de Lison reste rattaché comme étant le 1er réalisateur d'un équipement de ce type. A partir de celle-ci divergent deux séries d'équipements: les "Tomophotomètres" ou microphotomètres à balayage, exploreint l'objet par tranches photométriques linéaires juxtaposées et les "équidensitographes" explorant l'objet par tranches d'égales densités superposées. Parallèlement une autre évolution se dessine qui va de la photométrie en lumière blanche à la spectrophotométrie en passant par la microcolo- rimétrie, toutes ces méthodes pouvant en principe être associées aux précédentes. Limites. La limite absolue est la longueur d'onde de la lumière uti- lisée dont dépend le pouvoir séparateur du microscope. En feiit, bien d'autres facteurs limitants apparaissent, soit liés a l'objet: bruit de fond structural, géométrie, diffraction — soit liés à l'optique: ouverture, — soit liés à la chaîne détectrice, amplificatrice et traductrice généralement électronique: bruit de fond instrumental, dérives... Instruments. Brève description des principaux instruments utilisés pour: a) la photométrie globale microphotométrie directe ■■ densitométrie avec intermédiaire photogra- phique b) la photométrie ponctuelle Jsimple faisceau [double feiisceau c) la tomophotométrie d) 1' equidensitographie photographique e) l'equidensitographie électronique - 25- f ) la microcolorimétrie Jtrichrome Ipolychrome g) la microspectrophotométrie ponctuelle h) la tomospectrophotométrie i) la spectrotomophotométrie j)la microspectrographie d'étincelle et l'eccetron spectral pour le dépouillement automatique des spectres. Méthodes. Comparaison des performances des appareils à simple et à double faisceau. Choix des méthodes en fonction de la structure des objets, du niveau de l'analyse par rapport aux facteurs limitants, de la somme d'informations désirées par rapport au temps dont on dispose. Objets. Recherche sur objets animaux et végétaux des principaux corps: naturellement colorés, colorés spécifiquement; traduction qualitative et quantitative par rapport à la masse tissulaire et cellulaire. Extension des méthodes: aux dichroismes naturels, aux dichroismes provoqués par coloration, aux dichroismes de phase, aux fluorescences spécifiques, aux spectres d'émission. Classification sommaire par caractéristiques chimiques des corps dont l'étude a été faite ou est possible à l'aide de l'Histophotométrie en lumière visible. Classification sommaire par caractéristiques physiques (photoniques) des corps dont l'étude est possible à l'aide de la microphotométrie en lumière blanche ou mono chromatique Conclusion. L'histophotométrie dans le visible n'est qu à 1 aube du premier de ses plus beaux jours. Instrument essentiel de l'histologiste et du cytologiste, le microscope, outil jusqu'ici qualitatif au service du morphologique se transforme grâce aux microphotomètres qu on lui adapte en un instrument de mesure photométrique permettant une extension réelle à l'échelle de la cellule ou du tissu de la plupart des méthodes de la chimie analytique minérale et organique. Une nouvelle branche de la science où convergent l'histologie et la chimie: la "micromorphochimie" est en train de naître sous nos yeux, pleine d'avenir et de promesses tant dans le monde botanique trop souvent parent pauvre dans les réunions qui ont précédé notre Congrès que dans le monde animal et plus parti- culièrement en histologie humaine. - 26 - ANALYSE DE CERTAINS FACTEURS DE VARIABILITÉ DANS LE RELEVÉ DES DONNÉES HISTOMÉTRIQUES U. BIANCHI Istitnto di Anatomia Comparata dell'Università di Pavia e Centre di Studio per l'Istochitnica del C.N.R. L'importance que les données morphométriques ont assume, outre leur signification intrinsèque bien connue, dans les recherches quantitatives histophysiques et histophotométriques en particulier, a conduit l'Auteur à rechercher les conditions les meilleures pour permettre d'obtenir le degré de finesse et de précision nécessaire à la recherche quantitative. La variabilité des données est examinée par rapport à de multiples causes d'erreur de systématique ou dues au hasard, ainsi que la mesure dans laquelle ces facteurs agissent sur l'acquisition des mesures. On analyse en particulier la variabilité a) individuelle sur des objets divers et avec des micromètres différents, b) selon la courbure du champ, c) par rapport à de multiples systèmes de relevé des dimensions, d) sui- vant les conditions d'illumination de la préparation; les données sont vérifiées sur des modèles préparés à cet effet et dont les dimensions sont connues. On suggère de simples précautions permettant de relever plus correctement les données; on fait remarquer qu'il reste toujours une er- reur résiduelle qui peut influer davantage sur les mesures de quantité que la variabilité qui dépend de la détermination des concentrations. On propose en outre de nouvelles idées pour l'utilisation de l'histo- photométrie dans le but d'obtenir des données morphologiques, en analy- sant la forme, la situation, les dimensions de l'objet à examiner, et 1 erreur morphométrique probable au cours des relevés: ceci au moyen de la comparaison entre les données quantitatives obtenues, les unes indé- pendamment de la donnée morphométrique, les autres indépendamment des mesures de concentration et de volume. - 27 - QUANTITATIVE STUDY OF THE FEULGEN REACTION VVITH DNA CONTAINING CELLULOSE FILMS P. van DUIJN and J. P. PERSIJN Biochemical Section Laboratory for Pathology, Leiden, The Netherlands For quantitative study of cytochemical reactions with the aid of mode! substances it is désirable to incorporate such substances in a kind of artificial section. In this way the molecular environment of the cotnpound can be modified and the rapid changing of média, as is customary in many staining re- actions, can be imitated. | To study the Feulgen reaction, DNA was mixed with viscose (cellulose xanthogenate) and cellulose films were made from this mixture. On such films the Feulgen reaction, with appropriate controls, was carried out. Extinctions were measured while the membranes were in a stretched posi- tion in a spectrofotometer cell, filled with o-xylene. In this way the spectrum of the DNA-Schiff complex could be determined. At the site where the lightbeafn of the spectrofotometer had traversed the film, a part of the film of known surface area was punched out. The punches were dried, weighed and analysed for DNA-P. In this way the extinction measured could be corrected for local variations in thickness of the films and for loss of DNA from the films during the Feul- gen procédure. Results on the relation between the extinction measured and the DNA content after staining will be presented. - 28 - THE DEOXYRIBONUCLEIC ACID CONTENT OF LEUCOCYTES A. J. HALE* and SYLVIA J. WILSON Institute of Physiology, The University, Glasgow Investigations of Feulgen stained leucocytes of peripheral blood, bone marrow and lymph node, using an integrating microdensitometer, hâve shown that the modal amount of DNA in thèse cells differs from that of certain other cells of the same species. It has also been found that this différence is not due to différent Feulgen-reaction characteristics of leucocytes. The distribution about this modal value in normal bone marrow and lymph node is characteristLc of a normal actively dividing tissue. This is also true for most samples from the peripheral blood, bone marrow and lymph nodes of cases of leukaemia. In a certain small number of cases of leukaemia there is however a change in the distribution which is characteristic of certain malignant cells. The relationship between the degree of differentiation and the nucleo- protein content of leucocytes has also been investigated. ♦Présent address: Division of Pathology, Impérial Cancer Research Fand, Lincoln's Inn Fields, London, W.C.2. - 29 COMMUNICATION N° 2 QUELQUES ASPECTS QUANTITATIFS DE LA SYNTHÈSE DE L'A.D.N. EN RELATION AVEC L'HÊPATECTOMIE EXPÉRIMENTALE R. LAQUERRIÈRE et R. LAUMONIER Roaen Les modifications apportées dans la charge nucléaire en acide désoxy- ribonucléique (A.D.N.) des cellules hépatiques après hépatectomie sont, depuis quelques années, très étudiées. En particulier, les travaux de Stowell, de Fautrez. et ses collaborateurs font autorité. Mais certains aspects particuliers restent à dégager. Les phénomènes peuvent être présentés dans deux conditions: Hépatectomie simple, action du plasma de ces animaux à des sujets témoins. La méthode employée est une analyse sur coupes colorées par la réaction de Feulgen avec l'histophotomètre de L. Lison. Les animaux d'expérience sont la souris, le cobaye et le rat. En général, chaque tissu normal ou modifié est soumis à 100 mesures mi- nimum mais parfois à 200 ou 400. Dans des conditions identiques de préparation, et sur la même lame, la valeur diploïde théorique est déduite de la mesure de 50 noyaux, de spermatocytes I, du même sujet. Les résultats des deux séries d'études représentent un total d'environ 40 000 mesures. 1) Après hépatectomie de 1/3 environ du poids de l'organe, les sacrifices ont lieu à des dates échelonnées entre 24 h et 9 jours. La distribution des taux de D.N.A.chez la souris et le rat, aboutissent progressivement à un décalage de la classe 2n, qui s'approche de la classe 4n. Au 9ème jour les classes ont fusionné à 4n, et l'histogramme ne présente plus qu'une seule pyramide 4n. Chez le cobaye, où n'existe qu'une classe diploïde, la valeur augmente pour se situer entre 2 et 4n. Mais la fragilité de cet animal a réduit le nombre des résultats. 2) Pendant la période d'activé synthèse du D.N.A. le plasma (re- cueilli sur milieu citrate) de chaque animal a été injecté à des animaux normaux. Un grand nombre de témoins a reçu un plasma normal, ou du -30 - citrate, ou le culot hématique de centrifugation. Les injections ont été faites en utilisant un plasma recueilli aux 1er, 2ème, 3ême, 4ème et Sème jour, après hépatectomie, et les sujets récepteurs étaient sacrifiés soit au 1er, soit au 4ème jour après injection. Lorsque le plasma est prélevé au bout de 24 h, pea de modifications apparaissent. Par contre, au 4ème jour, le plasma induit une synthèse constante, et intense du D.N.A., atteignant 80 à 100%, réalisant même des taux octoploides. La propriété de ce plasma diminue puis disparaît au Sème jour. Tous les animaux témoins (36) ne présentent aucune modification de l'histo- gramme hépatique. Ce fait suggère donc la présence dans le plasma d'un animal hépa- tectomisé, d'un facteur de stimulation des synthèses de l'A.D.N. Ce facteur n'a jamais été retrouvé chez les sujets normaux témoins. 31 - SECTION V. SPECTROGRAPHIE INFRA-ROUGE RAPPORT SUR L'UTILISATION DE LA SPECTROMÉTRIE INFRAROUGE EN HISTOCHIMIE ET EN CYTOCHIMIE J. LECOMTE Membre de l'Institut Directeur de Recherches au Centre National de la Recherche Scientifique - 32 SECTION VI. FLUORESCENCE IfISTOSPECTROGRAPHIE DE FLUORESCENCE: RELATIONS FONCTIONNELLES ET BIOCHIMIQUES De LERM/V Bari La microspectrographie ou histospectrographie de fluorescence consiste dans l'analyse au microscope du spectre de la lumière de fluorescence émise, sous l'excitation ultraviolette, d'une partie bien délimitée d'une coupe. Le but d'un tel type de recherche biophysique est d'atteindre k l'identification de la nature chimique des substances fluorescentes dans le tissu par comparaison du spectre enregistré au microscope avec le spectre de composés déjà connus. Dans ce sens cette méthode ac- quiert la valeur d'une signification histochimique méthodique et précise. Le problème de l'identification des composés fluorescents sur coupes devient, en effet, un problème de spectrochimie et sa solution nécessite, avant tout, l'évaluation exacte et objective du spectre de la lumière de fluorescence émise d'une certaine partie des coupes. A l'exception de quelques substances biochimiques, telles que les porphyrines, les chlorophylles, dont le spectre de fluorescence est bien caractérisé par quelques bandes minces dans l'orange et le rouge, le plus souvent les substances fluorescentes contenues dans les tissus donnent des spectres qui consistent dans une large bande continue, dépourvue de structure et sans maxima caractéristiques. C'est pour cela que l'analyse spectro- photométriquç de la lumière de fluorescence enregistrée au microscope devient nécessaire. Et c'est pourquoi la méthode en question est designée plus exactement comme "histospectrophotométrie de fluorescence". L'appareillage dont s'est servi l'Auteur consiste essentiellement en un spectrographe à forte luminosité relié à un microscope de fluores- cence de telle façon que la délimitation de la structure fluorescente observée dans la coupe — et dont le spectre est à enregistrer — soit absolument précise. Après avoir traité explicitement des relations qui existent entre les fonctions chimiques et le spectre de fluorescence, l'Auteur examine quelques questions de strict intérêt histochimique, questions qui ont trait à l'identification de la sérotonine (5-hydroxytryptamine), de l'adréna- line et nor-adrenaline, de la Vitamine A et des hormones stéroliques. L'Auteur touche aussi la question de la fluorescence des chromolipoides dans ses relations aves le degré d'autoxydation de corps gras. -33 - Enfin il souligne l'intérêt que l'emploi de quelques fluorochromes présente pour l'histochimie, tel que l'acridine orange, la phosphine 3R, la rhodamine B, le rouge de Magdala, etc., aussi bien que le 3,4-benzopyrène qui, en tant que hydrocarbure polycyclique cance'rigène, peut donner lieu à des interactions avec l'acide désoxyribonucléique dans les noyaux de cellules vivantes. - 34 - IMMUNOHISTOCHIMIE H. MAYERSBACH Graz — Lausanne Les méthodes "d'immunohisto chimie", développées par Coons, qui con- sistent dans l'emploi d'un anticorps marqué pour repérer le matériel anti- génique des cellules et des tissus ont pris une importance de plus en plus grande en histochimie. A l'aide de ces réactions immunologiques, il est possible de montrer dans les cellules plusieurs substances (protéines, polysaccharides, etc.,) qui ne peuvent être mises en évidence de manière spécifique par d'autres techniques histochimiques. Le principe des réactions immunohistologiques est extrêmement simple: une préparation histologique est d'abord recouverte par une solution contenant un anticorps marqué à la fluorescéine; les cellules qui renfer- ment l'antigène spécifique précipitent l'anticorps marqué. Après lavage des protéines qui ne sont plus liées, la présence de l'antigène dans les cellules est prouvée par l'anticorps fluorescent qui est solidement attaché à lui. Malgré la simplicité du principe, plusieurs questions techniques impor- tantes se posent en connexion avec la préparation des réactifs et la confection des coupes. Cette communication traite exclusivement des possibilités et des questions techniques fondamentales: la spécificité des immuns sérums, le choix des substances de marquage et des procédés pour couper et fixer les tissus. Le facteur très important de l'absorption non spécifique du sérum à la surface des coupes (très rarement mentionné, bien qu il soit une source d'erreurs) est discuté en rapport avec les recherches de l'auteur portant sur ce domaine particulier. - 35 - THE USE OF A FLUORESCEIN-CONJUGATED BASIC POLYSACCHARIDE (APS) TO DEMONSTRATE ACIDIC POLYSACCHARIDES IN TISSUE* E. E. EVANS and S. P. KENT Departments of Microbiology and Pathology, University of Alabama Médical Center, Birmingham 3, Alabama, U.S. A. 36 - THE COMBINED FLUORESCENCE-PHASECONTRASTMICROSCOPY AS A METHOD OF INVESTIGATION IN THE PROCESS OF PHAGOCYTOSIS D. WITTEKIND Medizin. Univ. Klinik, Heidelberg The close combination of phase-contrast with fluorescence-mi croscopy has proved valuable in experiments on living cells. Phasecontrast-micro- scopy, demonstrating only the optical qualities of an object, will be use- fully completed by fluorochroming structures, e.g. by using a staining method. After a short explanation of constructive features of the combined microscope its qualification for recognising cell viability will be demon- strated with phagocytes as an example. The question is discussed of how ingested material may influence the way in which phagocyting cells are shown in fluorescence- and phase-contrast microscopy. The possibility is stressed of suspending living cells in concentrated isotonic protein solutions (f. i. albumin and globulin). When the protein content is suffi- ciently high, the cell will appear in négative phase-contrast. For keeping the cell interior in négative phase-contrast the cell membrane must ne- cessarily remain imperméable for substances of high molecular weight. Thus an additional and valuable hint on cell viability is given: Conserva- tion of négative phase-contrast being no reliable criterion of a living cell, a change to positive phase-contrast is not consistent with cell viability. The appearance of living cells is compared with that after fixation and use of staining methods, as a contribution to the question of how certain intravitally observed structures are résistent to histochemical procédures. - 37 - UN NOUVEAU CYTODIAGNOSTIC DU CANCER PAR MICROSCOPIE FLUORESCENTE L. von BERTALANFFY Une n éthode fluorescence-microscopique employant le fiuorochrome, Orange d'Acridine, était introduite récemment à distinguer les acides désoxyribonucléiques, les acides ribonucléiques et d'autres composants de la cellule. À cause de sa métachromasie, l'Orange d'Acridine, appli- qué par une technique adéquate, montre l'ADN, a fluorescente verte, et l'\RN, en raison de sa concentration, par des nuances brunes, rouges ou orangées brillantes. Par son application aux tissus normaux, des corréla- tions entre la teneur en ARN, la synthèse des protéines, l'activité mito- tique, etc., peuvent être établies. Le méthode à l'Orange d'Acridine est un nouveau moyen cytochimique pour le diagnostic du cancer en cytologie exfoliative. A cause de leur teneur exceçsive en ARN, les cellules malignes viables présentent une fluorescence rouge ou orangée intense J et peuvent être décelees facilement. Le diagnostic définitif est base sur des critères cytochimiques et morphologiques. Cette méthode présente des avantages importants, tels que la rapidité et la simplicité de la technique, la facilité de reconnaître les cellules malignes, la réduction du nombre de questions posées aux techniciens, etc. La certitude diagno- stique de la méthode est grande, et égale celle des autres procédés cytodi agnostiques qui exigent, elles, des investigations étendues. La méthode nouvelle est particulièrement de valeur pour la détection du cancer gynécologique et pulmonaire, mais elle est aussi valable dans le cadre général de la cytologie exfoliative. - 38 - APPLICATION D'HISTOPHOTOMETRE UNIVERSEL POUR ÉTABLIR LES COURBES DE FLUORESCENCE ET D'ABSORPTION L. ZANOTTI Istituto di Anatomia Comparata dell'Università di Pavia e Centre di Studio per l'Istochimica del C.N.R. L'Auteur a construit un histophotomètre particulier, conçu selon le prin- cipe des modèles Vialli. Un viseur "Reflex" relie, pour centrer l'image, le microscope àla fente d'entrée d'un monochromateur à réticule de Bausch et Lomb. Un photomultiplicateur, appliqué à la fente de sortie du mono- chromateur mesure l'intensité des différentes radiations. Quand on con- naît sa courbe de réponse on remonte à la courbe de fluorescence. On peut utiliser ce dispositif, tant avec la lumière transmise qu avec la lumière réfléchie et la radiation excitatrice s obtient â l aide d un dispo- sitif "fluorex" Reichert. Si l'on veut utiliser d'autres lumières excita- trices, on peut illuminer le dispositif "fluorex avec un second mono- chromateur, obtenant la concentration à l'aide d'une optique de quart/. L'appareil permet d'obtenir rapidement des courbes de fluorescence pouvant être reproduites parfaitement et met aussi en évidence la signi- fication de légères variations de couleur de la fluorescence même. A 1 aide de cet instrument, on peut également obtenir des courbes d absorption, soit dans le visible, soit avec une optique adaptée, dans l'ultraviolet. Comme exemple de courbes de fluorescence, nous avons étudié celles des glandes â venin de différents amphibiens. En particulier, 1 examen de "Discoglossus pictus", dont le venin est très riche en 5-hydroxytryp- tamine, a démontré la possibilité d'étudier des cadres très variés, en examinant même des granulations isolées. 39 - SECTION VII. POLARISATION POLARIZED MICROSCOPY IN HISTOCHEMICAL RESEARCH H. H. PFEIFFER Polarized optics, especially if applicated quantitatively, assist a micro- scopist to notable contributions to our knowledge of leptonic structure of biological and médical objects under physiological and pathological conditions. But beyond this main tas le, researches in polarization micro- scopy employed to fresh or fixed and sectioned tissues hâve also an important profit for securing and relief of identification of chemical compounds. Observations and measurements in polarized light are chiefly situated in the foUowing directions. 1) It occurs very rarely that definite substances may be recognized only on the behaviour against polarized light, as optical négative nucleic acids in contradistinction to the positive character of proteins; 2) At some anisotropic structures there are to produce topochemical reactions which are accompanied with a change of the optical character, e.g. after treatment with mono-valent phenoles, sumach-extract or glycerol. 3) By Lison it has been shown that lipoids if examined with polarized light can be allotted into several histochemical groups by means of a thermical claim so the further analysis simplifying. 4) The identification of crystalline précipitations comprehends trials with the polarization microscope to study the occurrence of anisotropy, its intensity and character, and the décision if dichroism (double absorption) appears. 5) Dichroism in ultraviolet light is found without staining in nucleic acids, whose purine and pyrimidine components may be arranged in parallel planes to eâch other and the electric vector of the polarized light. 6) Organic dyes such as Congo red or thionin may, in some cases, be attached to tissue components in such a way that the dye molécules are themselves oriented sufficiently to endow to structure with dichroic properties. In the face of ail thèse facts we hâve to admit that the polarization microscope ought to be used also in histochemistry. In some communi- cations we shall become acquainted with more expériences in that respect. -40 - SPEZIELLE POLARISATIONSOPTISCHE UNTERSUCHUNGEN AN EXPERIMENTELLVERANDERTEN BINDEGEWEBSFASERN LINDNER Hamburg Nachdem wir als primâre Folge cheraischer und mechanischer Schâdi- gungen von Bindegewebsfasem eine Stbrung der Faser-Kittsubstanzbezie- hungen gefunden haben, wurden systematische polarisationsmikroskopische Untersuchungen an isolierten Fasern der Rattenschwanzvene vorgeno- mmen. Wir priiften den Einfluss folgender Stoffe auf das polarisationsopti- sche Verhalten (und zugleich auf die Quellung, Gewichts-dicken und Volumenzunahme) der Kollagenfaser: 1. Niedermolekulare organische und anorganische Sauren und Vergleichslosungen, 2. Mucopolysaccharidsâuren und Makromolekulare Vergleichslosungen und 3. verschiedene Pharmaka, speziell Hormone und Antiphlogistica. Um die Stoff-oder Stoffgruppen-ab- hângigen Wirkungen auf die Faserstrukturen, bzw. auf die Beziehungen der Protein- und Polysaccharidanteile der Kollagenfaser môglichst fort- laufend beobachten zu konnen, wurden nicht nur inkubierte Fasern in verschiedenen Zeitabstanden untersucht, sondem vor allem Quellungs- und Entquellungsversuche unter direkter polarisationsoptischer Betrach- tung vorgenommen. Die Ergebnisse dieser Untersuchungen werden im einzelnen vorgewiesen. Sie sind in drei Punkten zusammenzufassen: 1. Die Wirkung der verschiedenen Testsubstanzen auf die isolierte Kollagen- faser ist im Prinzip nicht gleichartig, sondem unterschiedlich, in Abhan- gigkeit von den physikalisch-chemischen Eigenschaften der eindringenden Flussigkeit und deren Reaktionen mit den Faserbausteinen (und ihrem Gefuge). 2. Da ein Teil der Testsubstanzen korpereigene oder therapeu- tisch verwendete Stoffe sind, ergeben dièse Untersuchungen wichtige Einblicke in die Reaktionsmoglichkeiten von KoUagenfasern in vivo - im Bereich von Freisetzungen oder Anreicherungen der betreffenden Subs- tanzen im Bindegewebe. 3. Die detaillierten Befunde sind in der Lage, weitere Einzelheiten der komplizierten Struktur von KoUagenfasern auf- zuklaren. Die Kollagenfaser stellt eine kontinuierliche Série schraubiger - 41 - Aggregate ihrer Untereinheiten dar, zwischen denen Kittsubstanzen liegen. Dieser ausserordentlich innige Zusammenhang zwischen den Poly- peptid- und Mucopolysaccharidanteilen ist die Grundlage fiir die Struktur und Funktion der Kollagenfaser. Das gilt im Prinzip auch fiir die Retiku- lin- und Elastinfaser. - 42 - TOPOCHEMICAL REACTIONS IN POLARIZATION MICROSCOPY OF CONNECTIVE TISSUE AND ITS INTERCELLULAR SUBSTANCES G. ROMHÂNYI (Pécs) Topochemical reactions (TR) provide a useful approach to the study of the submicroscopic and chemical organisation of coUagen, elastic and reticulin fibres, and connective tissue ground substance. In an optical sensé by TR are ment events in which uncoloured or coloured compounds are associated in an orientated pattern on anisotropic substrates enhancing or reversing their original biréfringence. The type and strength of binding of the associating components in TR may vary from true chemical bonds to loose réversible adsorption. The optical effect of anisotropic staining — often associated with anomalous colours — can be markedly enhanced and stabilized by appropriate preci- pitating agents used after staining and also in the mounting médium. It was possible to show that by différent TR (phenol-anilin reaction and anisotropic toluidinblue staining) the elastic fibres of the aorta hâve a fibrillary structure with a spiral arrangement of their submicroscopic filaments, the degree of élévation of the helicoid being 45° in the elastic fibres of young humans and about 20 to 25 degrees in the elastic fibres of ox ligamentum nuchae. It was found that apart from their well known and characteristic phénol reaction (Ebner) collagen fibres showed anisotropic staining with the acridine dye rivanol becoming negatively biréfringent, which seems to be a characteristic TR of the collagen fibres. Recently considérable attention has been paid to the structural and functional significance of the AMP contained in the ground substance the structural organization of which has not yet ben clarified unambiguously. However, the fact that after anisotropic staining with appropriate basic dyes below pH 4*0 collagen fibres, and also collagen fibrils precipitated in vitro with CHS A, become negatively biréfringent can be related to the AMP component contained in the fibres in an organized pattern. Further- more, polarization optical findings suggest that metachromasia seen in - 43 - the collagen fibres is also due to an orientated alignement of the dye molécules, on the orientated AMP components in the fibre. Thus quantita- tive data on metachromasia can be obtained from polarization microscopy. J Différent chemical changes induced in the reactive side groups of the ' substrates influenced in a spécifie manner the topochemical reactivity of the collagen and elastic fibres as well as their enzymatic susceptibility to the enzyme elastase. - 44 - DIE BEEINFLUSSUNG DES POLARISIERTEN LICHTES DURCH DIE AMYLOIDSUBSTANZ H. P. MISSMAHL Aus der Medizinischen Universitatsklinik und Poliklinik Tiibingen Direktor: Prof. Dr. H. Bennhold An Hand der Literatur und eigener Untersuchungen wird der Einfluss von gefàrbtem und ungefârbtem Amyloid auf linear polarisiertes Licht darge- stellt- Im einzelnen werden dabei folgende Punkte besprochen. 1) Die Doppelbrechung des ungefârbten Amyloid, insbesondere bei beginnender Amyloidose. 2) Die Entstehung anomaler Polarisationsfarben an gefàrbtem Amyloid, deren Bedeutung fur den Nachweis kleinster Amyloidherde und fur die Klarung der Feinstruktur des Amyloid. 3) Das Auftreten von Dichroismus an der gefàrbten Amyloidsubstanz. 4) Das Verhalten von metachromatisch gefàrbtem Amyloid gegeniiber polarisiertem Licht. Aus Punkt vier ergibt sich der Beweis, dass aile von uns untersuchten metachromatischen Farbstoffe sowohl doppelbrechend, als auch dichroi- tisch sind. Die Metachromasie wird hierbei lediglich durch die gerichtete Einlagerung der entsprechenden Farbstoffe und die sich hieraus bedingte Summation der optischen Wirkung dieser Farbstoffe hervorgerufen. - 45 - RECHERCHES SUR LA MICROSCOPIE DE POLARISATION DES ACIDES NUCLÉIQUES. ACIDES NUCLÉIQUES DES TUMEURS J. suga'r Budapest La molécule de l'acide nucléique porte une stracture d'une double spi- rale (Watson et Criclc). On peut bien étudier histologiquement cette structure micellaire à l'aide d'un microscope polarisant et qui montre à sa longueur une biréfringence négative (Schmidt). Pour fortifier l'aniso- tropie, Mo Romhâhyi et M. Jobst utilisent un colorant dichroïque, nommé Rivanol. Depuis quelque temps cette substance est employée en renfor- cement de la biréfringence, non seulement des acides désoxyribonucléiques (DNA), mais celle des acides ribonucléiques (RNA). Au cours de nos investigations nous avons étudié par cette méthode la transformation du système des acides nucléiques dans les cellules de la tumeur d'ascite d'Ehrlich et dans une forme d'ascite de la leucémie lymphoïde, d'une part au cours d'une autolyse des cellules, d'autre part sous l'effet produit par les substances cytotoxiques: mannite, moutarde azotée, 6-mercaptopurine, etc. On pouvait constater que la biréfringence des acides nucléiques montrait un abaissement consi- dérable au moment de l'effet maximal dans la plupart des cellules. Un phénomène pareil se présente chez le sarcome de Crocker, expiante et traité in vitro. On pouvait observer ce phénomène quand ni la réaction de Feulgen, ni la coloration à la gallocyanine ne démontrait aucune différence d'intensité. Au cours d'une autolyse les substances se libèrent des acides nucléiques, étant examinées par une technique appliquée de chromato- graphie; on a constaté que la libération des nucléotides et des nucléo- sides se produit déjà après une durée de 3 heures et on arrive à un résultat considérable pendant 7 à 8 heures. Cette conclusion correspond à une diminution significative de la biréfringence des acides nucléiques. - 46 - DIE HISTOCHEMIE DER RETIKULXREN FASERN UNTER BERUCKSICHTIGUNG DER POLARISATIONSOPTISCHEN UNTERSUCHUNGEN J. SUGÂR Onkopathologisches Forschungsinstitut, Budapest Das Retikulin der Basalmembranen weist fiir gewohnlich eine positive Formdoppelbrechung auf. Missmahl's Untersuchungen nach wird die longitudinale fibrillàre Struktur von quergerichteten Lipid molekUlketten zusammengehalten, auf die auch die Erscheinung zuriickzufiihren ist, dass sich die positive Doppelbrechung der Fasern auf Glyzerininhibition zu einer negativen umwandelt. Unsere Untersuchungen an der Membrana basalis der Niere galten gleichfalls einer Analyse der Eigenschaften dieser interfibrillâren Struktur, wobei wir vor allem pruften, welche Veranderungen die Fixierung aus- lost, und wie die nachfolgende Behandlung mit Fettlosungsmitteln die oben beschriebene Xnderung der Doppelbrechung des Retikulins beein- flusst. Verbringt man nach vorangegangener Formalin- Fixierung die Gefrierschnitte in Fettlosungsmitteln, dann zeigt die Membrana basalis eine positive Doppelbrechung. Grundlegend àndert sich indessen die Lage, wenn man die Nieren in Alkohol fixiert und sodann in Paraffin montiert. Trotzdem nâmlich der Stoff in Fettlosungsmitteln gelegen hat, lâsst er — mit Glyzerin bedeckt — eine âhnliche négative Doppelbrechung erkennen, wie sie bei den nicht in Fettlosungsmitteln behandelten, gefrierschnitten zu beobachten ist. Auf biochemischem Wege gelang es, im Retikulin Lipide nachzuweisen, durch histochemische Farbung hingegen lasst sich hier Lipide nicht feststellen. Allein nach der Bouin-Fixierung ergibt sich eine positive Fettverfarbung. AU dies lasst die Feststellung begriindet erscheinen, dass in den interfibrillâren Strukturen neben den Lipiden auch andere quergeschichtete Ketten vorhanden sein diirften (Brewer). Das Verhalten der Doppel- brechung der Strukturfasem und der Verlauf der histochemischen Reaktion wird weitgehend auch von der Art der Fixierung beeinflusst. -47 - SECTION VIII. INTERFERENCE FEHLERBERECHNUNGEN FUR TROCKENGEWICHTSBESTIMMUNGEN MIT DEM BAKER'SCHEN INTERFERENZMIKROSKOP* H. G. SCHIEMER Aus dem Senckenbergischen Pathologischen Institut der Universifàt Frankfurt a. M., Es werden die einzelnen Fehlerfaktoren, die bei der interferenzmikrosko- pischen Bestimmung des Trockengewichtes biologischer Objekte auftre- ten, diskutiert. Bei den entsprechenden Uberlegungen bezieht sich der Verfasser auf die Trockengewichtsgleichung: 2 ^Tr. Kern= 3 '^ f AF . , d-F [gl 180°- X *^ X ftir sphàrische Objekte, Mit Hilfe der Gauss'schen Fehlerfortpflanzungstheorie wird der prozen- tuale maximale Fehler im Endergebnis bestimmt. Dieser liegt fur chemisch auf ihre Effekte ara Tumorbindegewebe gepriift (Ehrlich -Ca; Yoshida-Sarcom). Ein Teil der Wirkstoffe ist bei entsprechender Dosis primâr geweb- stoxiscb und nekrotisierend. Die Prolifération der Mesenchymzellen, MPS-Produktion und Fibrose sind als selbstândige, reparative VorgSnge anzusehen, die lediglich noch durcb das toxische Agens oder dessen Begleitstoffe modifiziert werden. Andere Pharmaka hingegen wirken unmittelbar hemmend bzw.stimu- lierend auf die am Tumorbindegewebe ablaufenden Reaktionen ein. Histo- chemisch lâsst sich zeigen, dass die verschiedenen Mittel einen unter- schiedlichen Angriffspunkt innerhalb der mesenchymalen Reaktionskette besitzen: Entweder wird eine unspezifische Zellproliferation ausgelôst (Polyvinylpyrrolidon, Eiweiss, AF 2, Adenôsinderivate), die Phosphatase- aktivitâtderFibroblasten stimuliert (Echinacea purpurea), die MPS-Bildung intensiviert(Echinaceapurpurea, DOCA) oder die Fibrillogenese gesteigert (DOCA, Adenôsinderivate). Bei der phasenbegrenzten Wirkung dieser Mittel ist es erforderlich, dass das Bindegewebe bereits von anderer Seite her aktiviert worden ist. Ein solcher Anreiz gebt z.B.von zerfallenden Anteilen der Tumoren aus. Demgegenttber entfalten vitale Tumoranteile keine proliferativen oder fibroplastiscben Reize (zumindest kommt es beim Tierturaor nicht zur Manifestierung derselben). Die Wirkung der gepriiften Pbarmaka ist also an bestimmte gewebliche Voraussetzungen gebunden. Die pharmakologisch oder -toxisch erreichbaren Effekte am Tumor- bindegewebe lassen sich histochemisch vollig mit jenen am normalen Bindegewebe vergleichen, sie werden von den benachbarten Tumorzellen nicht verhindert. Andererseits sind sie aber nur kurzfristig bestanding sie unterliegen schnell der Zerstôrung durch die Tumorzellen. -246 - INTRACELLULAR ACCUMULATION AND CRYSTALLISATION OF THE ANTITUBERCULOSIS RIMINO-COMPOUND, B.663 M. L. CONALTY and R. D. JACKSON Laboratories, Médical Research Council of Ireland, Trinity Collège, Dublin, Ireland The high antituberculosis activity of Rimino-compounds of the phenazine séries has been demonstrated in thèse laboratories and confirmed in others. It has provcd possible to demonstrate this activity even when treatment has been completed one to four weeks before infection with tubercle bacilli. It has been found that on administration of thèse compounds high concentrations of the drugs are built up and are retained in the tissues. The communication will deal specifically with one of thèse compounds, B.663 (2-p-chloroanilino-5-p-chlorophenyl-3:5-dihydro-3-isopropyliminophe- nazine). High tissue concentrations are due to the accumulation of drug within macrophages, and continued treatment can resuit in intracellular crystallisation. The séquence of events leading to this unique phenomenon and the possible mechanisms involved, will be discussed. The effect of thèse intracellular accumulations on cell activity, including phagocytosis, will be described, together with détails of their influence on the histo- logical pattem within varions tissues. - 247 - HISTOCHEMISTRY IN EXPERIMENTAL CANCER CHEMOTHERAPY M. A. PRESNOV Institute of Expérimental and Clinical Oncology, Academy of Médical Sciences, U.S.S.R., Moscow 1. The results of histochemical investigation of the action of some anti- tumour drugs on transplanted rat and mouse tumours will be reported. 2. The changes of the tumour cells and connective tissue stroma found by means of more than 10 various histochemical methods will be demon- strated. 3. The application of the histochemical methods, e.g. démonstration of nucleic acids, neutral fat, glykogene, metachromasia, some enzymes (phosphatase, esterase, oxydative enzymes etc.) showed their great value for expérimental studies in the new branch of oncology-cancer chemo- therapy. - 248 CHANGES IN NUMBER AND ANHYDROUS MASS OF ANTERIOR PITUITARY CELLS OF RATS AFTER ADMINISTRATION OF PROPYLTHIOURACIL R. C. BAHN, G. T. ROSS, R. W. SCHMIT and R. C. McELMURY Mayo Clinic and Mayo Foundation, Rochester, Minnesota - 249 - LES MODIFICATIONS DE L'ACTIVITE PHOSPHATASIQUE TISSULAIRE DES LAPINS INTOXIQUÉS PAR L'ACIDE SILICIQUE M. GÛNDISCH, T. FESZT, I. SZABÔ et Z. DÉZSI Chaire d'Histologie d'Institut de Médecine et Pharmacie de Tîlrgu-Mures, Roumanie Après un treiitement intraveineux avec SiOj des lapins, l'activité histo- chimique de la phosphatase alcaline, augmente dans les parois interal- véolaires pulmonaires, dans les espaces portes et régions périphériques des lobules hépatiques et même dans les corpuscules de Malpighi de la rate. Dans le foie, 1 enzyme se révèle aussi en dehors des cellules. Ces modifications s expliquent comme des processus de dégenération cellulaire et de prolifération du tissu conjonctif à la suite d'intoxication chronique par le silicium. L'activité phosphatasique acide a diminue elle même dans le cyto- plasme des cellules he'patiques, ainsi que dans la rate, exprimant une at- teinte de l'appareil enzymatique fonctionnel de la cellule. - 250 - SECTION VIII. HISTOCHIMIE VEGETALE HISTOCHEMICAL LOCALIZATION OF PROTEIN-BOUND SULFHYDRYL GROUPS IN PLANT TISSUES L. W. ROBERTS Department of Botany, University of Idaho, Moscow, Idaho -251 - COLORATION ARGENTIQUE D'UN COMPOSANT NUCLÉOLAIRE. ORIGINE ET COMPORTEMENT PENDANT LA MITOSE N. K. DAS et MAX ALFERT Départ, de zoologie, Université de Californie, Berkeley, Californie A l'aide d'une nouvelle méthode d'imprégnation argentique on a étudié dans les cellules méristématiques des racines d'oignon le comportement cyclique d'un composé nucléolaire autre que L ARN. Ce composé semble être libéré dans le cytoplasme durant la prophase, est absent des chromosomes pendant la métaphase et l anaphase et réap- paraît autour des chromosomes au début de la télophase. On démontrera que chaque chromosome tout entier contribue à la forma- tion de ce composé. -252 - THE LOCALIZATION OF NUCLEIC ACID SYNTHESIS IN ROOT MERISTEMS F. A. L. CLOWES Botany School, Oxford University, Ejigland The classical methods of investigating apical meristems ignore rates of cell division and therefore lead to false conclusions about organization. The use of autoradiography in investigating the synthesis of DNA shows that there is a quiescent centre in root meristems where the cells do not divide at allor divide very rarely. This method dépends upon the incorpora- tion ofprecursorsof DNA being équivalent to net synthesis and net synthe- sis indicating préparation for mitosis. Thèse assumptions appear to be valid for meristems, though not necessarily so for other tissues, and the conclusions made from them can be confirmed by other methods. The degree of quiescence of the cells varies with the size of the apex, and is low in roots with single apicâl cells and in the early embryonic stages oflarger roots. The cells of the quiescent cemtre raay be induced to synthe- sise DNA and enter mitosis by suitable surgical or X-ray treatments. Quantitative results may be obtained about the ploidy of cells by measur- ing the rate of synthesis over short periods. The duration of the mitotic cycle may also be measured for ail the parts of the meristem by counting the proportion of nuclei labelled after varions exposures to the radioactive precursors of DNA. -253 - HISTOCHEMICAL STUDIES OF THE ENZYMES OF THE ROOT EPIDERMIS CHARLOTTE J. AVERS Dept. of Biology, Douglass Collège, Rutgers — The State University, New Brunswick, New Jersey, U.S. A. Enzyme activities in Phleum hâve been correlated with development of hair and hairless cells of the tissue. The apical meristem initiais were diffère ntiall y active for succinic dehydrogenase and adenosine mono- phosphatase, but were equally active for other enzymes studied. Once the cells had left the meristera and entered the zone of elongation, both cell types showed no activity for thèse two enzymes, but were differentially active for acid phosphatase and cytochrome oxidase. Peroxidase activity differentiated thèse cells later as they prepared to mature morphologically. Only a few of the most apical cells showed glucose-6-phosphatase activ- ity, and this enzyme did not appear to be active in mitotic or rapidly elongating cells of Phleum, whereas there was activity in other grasses studied. Thèse enzyme activities apparently characterized the two kinds of epidermal cells at various stages of their development, and appeared long before morphological maturation and the end of elongation. The intracellular localizations were particulate or non-particulate in agreement with localizations obtained by other techniques. Enzyme localizations in meristem cells were also obtained for adenosine triphosphatase, dehydro- genases, and an esterase, in addition to those studied for their distribution in the several developmental zones of the root epidermis. -254- THE DISTRIBUTION AND LOCALIZATION OF NUCLEIC ACIDS IN ROOTS W.A. JENSEN Department of Botany, University of Califomia, Berkeley 4, Califomia - 255- A SURVEY OF CURRENT APPROACHES TO QUANTITATIVE HISTOCHEMISTRY OF PLANT TISSUE D. GLICK Department of Physiological Chemistry, University of Minnesota, Minneapolis, Minn - 256 - HISTOCHEMICAL STUDIES ON LIGNIN FORMATION S. M. SIEGEL Department of Sociology, University of Rochester, New York -257 - HISTOCHEMICAL LOCALIZATION OF PROTEIN-BOUND AMINO GROUPS K. SURREY Division of Biological and Médical Research, Argonne National Laboratories, Lemont, Illinois -258 - HISTOCHEMICAL STUDIES OF STEM MERISTEMS R. M. TIEFEL Department of Biology, Carthage Collège, Carthage, Illinois - 259 - A SURVEY OF THE SIGNIFICANCE OF ENZYME LOCALIZATION TO THE SOLUTION OF PROBLEMS IN PLANT PHYSIOLOGY D. S. VAN FLEET Department of Botany, University of Toronto, Toronto, Ontario, Canada -260 - SECTION IX. HISTOCHIMIE ET EMBRYOLOGIE ACQUISITIONS REGARDING ENZYMATIC HISTOCHEMISTRY IN PRENATAL DEVELOPMENT F. ROSSI and E. REALE Università di Genova, Istituto di Anatoraia Umana Normale Researches in enzymatic histochemistry during the prénatal development of man and other animais had, already in 1954, made it possible for Rossi, Pescetto and Reale to affirm that the activities of enzymes are to be introduced, on positive basis, among the factors presiding morphogenesis and histogenesis of the embryo and the foetus. Thèse researchers, though not neglecting investigations other than on man, hâve related particularly their expériences in the human field. From 1954 to the présent time, studies in activities in the embryo and in the foetus, also in the very earliest stages of its development, hâve multiplied both in the biochemical and in the histochemical field proving this to be an extremely fertile and most interesting ground and demonstrating that the collaboration of well known morphogenetic factors, as for istance the organizing centres, and of other not yet revealed relies on cellular processes which, more and more numerous, identify themselves with the group of chemical reactions catalyzed by enzymes. Many other enzymes revealed by new techniques can be added today to those (non spécifie alkaline phosphathases, acid phosphathases, non spécifie estecases, succinicdehydrogenase) the intervention of which during development was illustrated by Rossi, Pescetto and Reale. Further- more the improving of earlier techniques has led to a more exact qualifica- tion and localization of reactions. Thèse récent acquisitions, although not substantially modifying the conclusions reached in 1954 by Rossi, Pescetto and Reale, hâve intro- duced a quantity of new data both on man and on other animais, which datashould be known and on which Rossi and Reale raport on the occasion of the First International Congress of Histochemistry. - 261 - ETUDE DE LA SYNTHESE DES ACIDES NUCLÉIQUES EN CULTURE DE TISSUS, PAR DES MÉTHODES AUTORADIOGRAPHIQUES ET BIOCHIMIQUES EMPLOYANT DES NUCLÉOSIDES PYRIMIDINIQUES MARQUÉS AU TRITIUM L. E. FEINENDEGEN and V. P. BOND Médical Research Center, Brookhaven National Laboratory, Upton, L. I., N. Y. L'intégration de cytidine marquée au tritium dans les acides nucléiques a été étudiée sur des cellules HeLa-S* en cultures de tissus. Des mé- thodes autoradiographiques et biochimiques ont été utilisées. L'évolution chronologique du marquage de l'ARN observée par auto- radiographies, et en particulier de la partie chromatinienne du noyau au cytoplasme et la démonstration de la conservation complète de la cytidine et de l'uridine de l'ARN macromoléculaire dans l'étude expéri- mentale du turnover, est en faveur de l'hypothèse du rôle de précurseur de l'ARN nucléaire vis-à-vis de l'ARN cytoplasmique.' L'entrée directe de la cytidine tritiée dans le métabolisme de 1 ADN est totalement concurrencée par de l'uridine non-radioactive, partiellement par de la thymidine, pas du tout par de la desoxycytidine. Après une fixation initiale rapide de la cytidine marquée au tritium, une fixation continue des métabolites marqués a été observée même jusqu a 48 h. après. Cette fixation tardive n'a plus été que partiellement concurrencée par la cytidine non-radioactive, à un degré moindre encore par 1 uridine. Aucune différence n'a été observée entre l'action compétitive de la thy- midine et de la desoxycytidine dans ce cas. L'analyse des temps de dis- ponibilité après le marquage initial dans diverses conditions, a montre un temps de turnover constant pour le dernier précurseur. Ces résultats suggèrent l'existence d'un système fermé de précurseurs entre les nucleo- tides simples et l'ADN, qui ressemblerait à un compartiment intermédiaire avec un temps de turnover constant et dont la direction métabolique serait principalement vers l'ADN et, peut-être, l'ARN. -262 - CYTOCHIMIE DU KINETOPLASTE DU TRYPANOSOMA CRUZI YVONNE DELAUNEY et N. K. DAS Université de Californie, Département de Zoologie, Berkeley Des cultures en pleine division de T. cruzi, sur milieu agar-sang, ont été soumises à la thymidine-H3 (4 (ic/cc) et à la cytidine-H3 (5 f/c/cc). Des gouttes pendantes de cultures ont été exposées aux vapeurs d'acide osmi- que puis de formol neutre. Les lames avec gouttes de cultures soumises à la thymidine-H3 ont été colorées au Feulgen avant d'être enveloppées de films autoradiogra- phiques, tandis que dans le cas de la cytidine-H3, une coloration au bleu de toluidine a été faite après la pose des films sur les lames. Nous pouvons confirmer les observations déjà faites à propos de la réaction Feulgen positive du Kinétoplaste, contenant de l'ADN. D'autre part la coloration au Fast-green alcalin, permet de mettre en évidence la présence de protéines basiques (histones) dans les Kinéto- plastes ainsi que dans les Noyaux. La substance du Kinétoplaste semble ainsi très proche de la chromatine dans ses caractéristiques cytochimi- ques essentielles. Après de courtes expositions à la thymidine-H3 (jusqu'à environ 15 min.) soit les Kinétoplastes soit les Noyaux sont marqués dans la majorité des cellules et seules quelques cellules montrent des Kinéto- plastes et des Noyaux tous deux marqués. Après de plus longues périodes d'incorporation, de 30 a 180 min., les Kinétoplastes et les Noyaux sont tous deux marqués dans la majorité des cellules. Ceci démontre que les temps de synthèse de l'ADN, peuvent jusqu'à un certain point se chevau- cher mais ne sont pas exactement simultanés dans les deux structures. Les processus de la division ne coïncident pas, la division nucléaire pré- cédant celle du Kinétoplaste. L'incorporation de la cytidine-H3 dans l'ARN se fait rapidement dans le noyau et est plus tard aussi visible dans le cytoplasme, ainsi que pour de rares cas dans le Kinétoplaste. On n'a pas pu encore déterminer si le marquage de l'ARN dans le Kinétoplaste est un effet spécifique ou un effet de superposition de l'activité cyto- plasmique. - 263 - AUTORADIOGRAPHIC STUDIES OF H'-THYMIDINE INCORPORATION IN NORMAL AND HYBRID FROG EMBRYOS BETTY C. MOORE Department of Zoology, Columbia University, New York Incorporation of tritiated thymidine by the early embryos of diploid and androgenetic haploid R. pipiens and diploid and androgenetic haploid hybrids between R. pipiens^ y- R. sylvaticaO has been studied. Two sorts of experiments were carried out. In one, H^-thymidine was injected into an adult female pipiens and the radioactive eggs utilized. In the other, H^-thymidine was injected directly into the eggs before first cleavage. It has been demonstrated that there is an increased utilization of H'-thymidine at the blastula stage as compared to early cleavage stages. It is concluded that cytoplasmic deoxyribopolynucleotides are used in chromosomal replication at early cleavage stages. In (pip) syl embryos, utilization of pipiens cytoplasmic deoxyribo- polynucleotides by sylvatica chromosomes in their replication could resuit in inexact copies of the genetic material, which would lead to abnormal development. - 264 - RNA AND DNA METABOLISM IN HUMAN TISSUE CULTURE CELLS STUDIED WITH TRITIATED CYTIDINE L. FEINENDEGEN, V. P. BOND, W. W. SHREEVE and R. B. PAINTER Médical Research Center, Broc khaven National Laboratory, Upton, L. I., New York The autoradiographic technique combined with biochemical methods was employed to study aspects of RNA and DNA metabolism in human tissue culture cells, incubated with tritiated cytidine. 1. Tritiated cytidine was incorporated within minutes into ail intact nuclei of HeLa S' cells and Osgood leukemic cells. The label subse- quently increased over the nucleoli and over the cytoplasm. 2. This séquence of labeling was defined and quantitatively observed in turnover studies, in \^ich| the cultures were incubated with the labeled nucleoside for a short time only followed by growth in carrier cytidine supplément ed médium. While nuclear label decreased, cytoplasmic label became visible and most nucleoli temporarily accumulated label with a maximum at 1 hour after cessation of incubation with tritiated cytidine. Desoxy cytidine as carrier in the new médium failed to prevent further uptake of tritiated cytidine, which was apparently not removed by washing of the cultures. It is concluded, therefore, that the cytidine incorporation dépends on enzyme Systems, différent for that of desoxycytidine. Prepara- tory steps for autoradiography of the cells extracted an appréciable amount of activity, which. declined after cessation of the incubation with tritiated cytidine. Some label was obviously also extracted from the chromatin portion of the nucleus. RNA synthesis stops while the cell is in nitosis as evidenced by the lack of incorporation of tritiated cytidine into dividing cells. Evidence is presented indicating that the tissue culture cells syn- thesize RNA, also during DNA synthesis period. 3. Tritiated cytidine is incorporated into DNA during DNA synthesis. Compounds not jreviously incorporated into DNA during short term in- - 265 - cubation with tritiated cytidine were found to be utilized at a later time for DNA synthesis. 4. The majority of the incorporated cytidine is recovered in the RNA. The label in the acid soluble pool déclines steadily with time after cessa- tion of incorporation of the labeled cytidine, while H' RNA was stabil. 5. It is confirmed for HeLa cells that cytidine is in part converted to thymine for DNA synthesis and uridine for RNA synthesis. The expérimental results lend support to the hypothesis that RNA syn- thesis begins in the chromatin portion of the nucleus. The fate of the incorporated cytidine apparently is decided in the nucleus, where it is first linked specifically and from where it progresses to the building blocks of nucleolar and cytoplasmic RNA or DNA. - 266 - SECTION X. TRACTUS GENITAL ETUDE HISTOCHIMIQUE DE LA RÉPARTITION DE CERTAINS ENZYMES DANS LES TISSUS UTÉRINS ET PLACENTAIRES CHEZ LES MAMMIFÈRES M. PANIGEL Laboratoire de Biologie animale du Collège Scientifique Universitaire de Tours et Laboratoire de Recherche de la Maternité de l'Hôpital Saint Antoine de Paris Après une révision de la liste des enzymes détectées jusqu'ici dans 1 utéras et le placenta, nous envisagerons quelles possibilités offrent les techniques actuelles de l'histochimie pour localiser un certain nombre de ces enzymes dans la muqueuse utérine et les formations placentaires des Mammifères. Nous étudierons tout particulièrement, tout au long de la gestation, la répartition dans les tissus déciduaux et trophoblastiques, des enzymes appartenant au groupe des estérases (phosphoestérases spécifiques 5-nucleotidase, cholinestérase). Les données fournies par l'histochimie seront discutées en fonction des questions soulevées par l'étude du métabolisme des glucides, des lipides et des protides ainsi que par les recherches physiologiques sur l'hémodynamique utero- et foeto-placen taire et sur la perméabilité du placenta. -267 - I i